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固定化酶生产葡萄糖酸钠研究 　　 摘要：葡萄糖酸钠作为一种重要的有机产品，广泛应用于制药、食品、建筑等行业。本文简单介绍了葡萄糖酸钠的用途，着重论述了黑曲霉中葡萄糖氧化酶的提取方法、初步纯化方法和酶的固定化方法。本文为用酶法连续生产葡萄糖酸钠提供了理论依据。 　　关键词：葡萄糖酸钠；提取；初步纯化；固定化 　　Abstract:Sodium gluconate is an important organic products and has a variety of potential applications in pharmaceutical,food and construction industries. This article explains the use of sodium gluconate, focuses on the extraction of glucose oxidase in Aspergillus niger, preliminary purification and method of enzyme immobilization. This article provides a theoretical basis using a continuous production of sodium gluconate with enzyme. 　　Key words: Sodium gluconate; extraction; preliminary purification; immobilization 　　中图分类号： TQ921+.2 文献标识码： A 文章编号： 　　1 引言 　　葡萄糖酸钠是一种白色或淡黄色结晶粉末，易溶于水，微溶于醇，不溶于醚，无毒，可用于制药工业和食品行业，是优良的呈味改良剂，本身的呈味性优良，还有掩盖苦味和臭味、改良呈味性效果，是优良的食品加工pH缓冲剂，在建筑业中作为减水剂、缓凝剂等。 　　20世纪90年代以来，葡萄糖酸钠应用技术取得了很大的突破，并形成了一个很大的产业，微生物技术在近几年发展迅速，成为目前大工业化生产的主流。 　　进入二十一世纪，随着葡萄糖酸钠在建筑、医药、化工等方面应用的不断开拓，市场需求量不断增加，尤其是在建筑行业，伴随着我国城市化进程的加快，作为减水剂和缓凝剂的优势得到充分体现，市场需求量不断扩大。 　　传统发酵法生产葡萄糖酸钠，产生大量的废菌丝。这些菌丝往往得不到充分利用，或者被当做饲料卖掉，或者直接当废物处理，其中的葡萄糖氧化酶得不到充分利用。 　　本文章提供了一种葡萄糖酸钠的新的生产思路，同时能使工厂的废菌丝得到充分利用。该方法就是先将废菌丝中的葡萄糖氧化酶提取出来，然后将葡萄糖氧化酶固定化，使用固定化酶生产葡萄糖酸钠。酶法生产葡萄糖酸钠，产物单一，容易分离，同时节约了培养菌丝体的时间。 　　2 葡萄糖氧化酶的提取 　　葡萄糖氧化酶为胞内酶，需要先将菌丝破壁，使其中的葡萄糖氧化酶释放出来，而且要采取措施保证酶的活力损失最小。获得的初酶液，再经过初步纯化，为后续的固定化打好基础。 　　2.1 细胞破碎的方法 　　细胞破碎的方法很多，可以分为机械破碎法、物理破碎法、化学破碎法和酶促破碎法等。 　　2.1.1 机械破碎法 　　通过机械运动所产生的剪切力的作用使细胞破碎的方法，称为机械破碎法。常用的破碎机械有组织捣碎机、细胞研磨器、匀浆器等。研磨时可以加入石英砂，提高研磨效率。 　　2.1.2 物理破碎法 　　通过温度、压力、声波等各种物理因素的作用使组织细胞破碎的方法，称为物理破碎法。物理破碎法多用于微生物细胞的破碎。 　　常用的物理破碎法有： 　　（1）温度差破碎法：利用温度的突然变化，细胞由于热胀冷缩的作用而破碎。 　　（2）压力破碎法：通过压力的突然变化，使细胞破碎。常用的有高压冲击、突然降压及渗透压变化等方法。 　　（3）超声波破碎法：利用超声波产生器所发出的10～20kHz的声波或超声波的作用，使细胞膜产生空穴作用而使细胞破碎。 　　2.1.3 化学破碎法 　　通过各种化学试剂对细胞膜的作用使细胞破碎的方法，称为化学破碎法。常用的化学试剂有甲苯、丙酮、丁醇、氯仿等有机溶剂和特里顿、吐温等表面活性剂。 　　2.1.4 酶促破碎法 　　通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用，使细胞外层结构受到破坏，而达到细胞破碎的目的。 　　利用细胞本身的酶系的作用，在一定的pH值和温度条件下保温一段时间，使细胞破坏，而使细胞内物质释出的方法，称为自溶法。自溶法效果的好坏取决于温度、pH值、离子强度等自溶条件的选择与控制。 　　根据细胞外层结构的特点，还可以外加适当的酶作用于细胞，使细胞