地塞米松对甲醛吸入肺水肿大鼠心肺脑及血清乙酰胆碱脂酶活性影响.docVIP

地塞米松对甲醛吸入肺水肿大鼠心肺脑及血清乙酰胆碱脂酶活性影响 　　【摘要】目的喷雾吸入甲醛复制大鼠急性肺水肿并研究地塞米松对其心、肺、脑及血清乙酰胆碱脂酶（AchE）的干预作用。方法27只SD大鼠随机分对照组、甲醛组和甲醛加地塞米松组。甲醛加地塞米松组于造模前半小时腹腔注射地塞米松磷酸钠注射液10mg.kg-1，其余两组注射等量生理盐水。造模8h后眼球采血处死，取心、肺称重并计算肺/心系数，肺组织作常规病理切片H.E染色。血清和心、肺、脑组织匀浆测定蛋白浓度和AchE活性；对照组以生理盐水替代甲醛，处理方法同上。结果与生理盐水对照组比较，甲醛组和甲醛加地塞米松组大鼠肺/心系数均显著升高（P0.05，P0.01）；甲醛组和甲醛加地塞米松组肺匀浆AchE显著增高（P0.05，P0.01）而心匀浆AchE显著下降（均P0.01）；甲醛加地塞米松组心匀浆AchE较甲醛组显著回升（P0.05）。病理切片镜下观可见甲醛组肺组织呈间质性肺水肿，甲醛加地塞米松组肺类似甲醛组但轻微且局限。结论喷雾吸入甲醛肺水肿大鼠肺组织AchE显著增高而心组织AchE显著下降，地塞米松能部分减轻但不能完全阻止肺水肿的发生。 　　【关键词】急性肺水肿；乙酰胆碱脂酶（AchE）；甲醛；地塞米松；大鼠 　　甲醛对人体有损害已广为人知，大量吸入甲醛导致肺水肿临床上也偶有报道[1]，此类肺水肿动物模型也已能复制[2-3]。但有关其机制和防治的研究报道甚少。本实验通过复制此类肺水肿模型并给予地塞米松干预，观测大鼠血清、心、肺、脑等组织乙酰胆碱脂酶（acetylcholinesterase，AChE）的变化及地塞米松的干预效果，为研究其机制及治疗提供实验依据。 　　1材料与方法 　　1.1实验动物试验动物为27只大鼠，均为SD成年大鼠，均为清洁级，大鼠的体重为200-250g。均由广西医科大学动物实验中心提供，动物合格证号：SCXK桂2003-0003。 　　1.2器械设备和药品DT12001型电子天平（余姚市金诺天平仪器有限公司），JA1003型上皿电子天平（上海天平仪器厂），722s型可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司），TGL16C型台式离心机、TDL5A型台式离心机（均为上海安亭科学仪器厂），双马牌温度-湿度计（蓝天公司提供）；大鼠类手机器械、实验器材等由广西医科大学基础医学院生理科学实验室和药学院药理实验室提供。40%甲醛（分析纯，由成都市科龙化工试剂厂生产，批号；考马斯亮兰蛋白测定试剂盒、乙酰胆碱脂酶（AchE）试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号均。 　　1.3实验装置喷雾器为市售浇花喷壶，广州振业有限公司生产；染毒箱容积约为0.4×0.4×0.4m3=64L，用厚度3㎝有机玻璃板裁剪粘合而成，顶盖可拆卸。染毒箱侧壁通过钻洞用一导管外套硅胶管穿过，一端连接加氧泵另一端插入烧杯内甲醛溶液中，加电连续给箱内泵入空气，染毒箱底部及鼠笼顶部四角多处用培养皿各盛一定量（约100g）钠石灰，以吸收大鼠呼吸产生的CO2和箱内水蒸汽。 　　1.4实验方法大鼠随机分对照组、甲醛组和甲醛加地塞米松组，甲醛加地塞米松组于造模前半小时腹腔注射地塞米松磷酸注射液10mg.kg-1体重，其余两组注射等量生理盐水。参照文献[4]甲醛组和甲醛加地塞米松组喷雾吸入甲醛制作肺水肿模型，对照组以生理盐水替代甲醛，处理方法同上。染毒结束后，大鼠禁食不禁水，8h后眼球采血，以3000rpm离心10min取上清液获血清待测；然后颈椎脱臼处死，解剖观察并称量心、肺湿重，计算肺/心系数，另取少量肺组织用10%甲醛固定作常规病理切片和H.E染色，同时留取新鲜心、肺、脑组织置于液氮速冻。5min再转入-70℃超低温冰箱冻存待测。组织匀浆和蛋白含量测定参照考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒说明书，AchE测定参照乙酰胆碱脂酶测定试剂盒说明书。 　　1.5数据处理与统计肺/心系数=两肺重量（g）/心脏重量（g）×100%，结果以（χ±s）表示，用PEMS2.0进行两样本均数比较t检验，以P0.05判断为有显著性差异。 　　2结果 　　2.1动物表现及染毒箱内温度和湿度经试验研究显示，试验动物的各项表现与文献[2-3]类似，对其进行染毒后，动物可表现出口唇紫绀、张口喘气、排便增多、流涕、躁动、抓鼻、喷嚏、流泪等情况。测得箱内温度20.0±0.5℃，相对湿度为97.5%。 　　2.2大鼠肺/心系数和心、肺、脑组织匀浆及血清乙酰胆碱酯酶（AchE）的变化结果见表1。 　　2.3病理形态学改变试验中发现对对照组大鼠进行解剖显示其组织为边缘锐利、质地均匀、粉红色表现。而解剖甲醛组时发现其肺部组织出现边缘变钝、体积增大、颜色加深的表现，在其肺部组织的表面可看到淤点