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基因工程实验 基因工程实验 西北农林科技大学生物学实验教学中心 生物秀—专心做生物！ 易生物-领先的生物医药商务平台 生物秀论坛-学术交流,资源共享,互助社区 /bbs/ 本门实验课程根据基因工程的本质而设计的一门综 合性和设计性的大实验。实验周期为 10天左右，主 要针对生物技术和生物工程本科生开设。主要内容 为小鼠β-actin基因在大肠杆菌中的诱导表达及 Western Blotting检测。 西北农林科技大学生物学实验教学中心 实验目的： 实验目的： 使学生进一步了解基因工程的基本过程。 使学生进一步掌握从基因克隆到原核转化、诱导表达的 基本操作和实验方法。 使学生进一步提高前期分子生物学实验技能的综合运用 能力。 训练学生查阅资料，设计实验等科研能力，以及对分子 生物学试剂药品的熟悉和选择应用能力。 使学生掌握第二种分子杂交技术-Western Blotting技术。 培养学生理论（分子生物学理论）联系实验的能力。 西北农林科技大学生物学实验教学中心 实验过程： 实验过程： 指导教师给出实验题目，引导学生设计实验过程，查 阅实验方法，制定引物合成方案，选择各种酶试剂。 小鼠肝脏RNA提取，RT-PCR扩增目的基因片段。 目的片断胶回收，表达引物二次PCR扩增。 目的片断PCR产物回收，表达质粒提取 目的片断和载体的双酶切，回收 连接反应，转化感受态大肠杆菌，阳性克隆的PCR鉴 定。 重组质粒的提取，转化表达大肠杆菌菌株，诱导表达 表达蛋白的SDS检测 表达蛋白的Western Blotting检测。 西北农林科技大学生物学实验教学中心 基因工程的概念 基因工程（基因操作）：主要是利用 DNA 重组技 术，将生物的某个基因或一个DNA 片段通过基因载体 （DNA载体）运送到另一 生物的活性细胞中，然后经过 克隆 （clone）和行使正常功能 （表达），从而创造生物 新品种或新物种的遗传学分子技术（从细菌到高等生 物）。 体外DNA突变 基因工程 体外基因操作 操作对象： 核酸 （一般为DNA） 采用技术： 生物化学方法 分子生物学方法 遗传学方法等 西北农林科技大学生物学实验教学中心 各种来源：同源，异源， 原核或真核，天然或人工 DNA分子 + 载体 合成的 重组子（复制子）遗传物质的新组合 输入（转化） 细菌或真核细 宿主细胞 胞 转化细胞 筛选转化子 克隆 基因分析 转表达载体 序列测定 亚克隆 基因功能研究 阅读框架分析