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基于SRAP标记湘产百合核心种质库构建 　　摘要：利用相关序列扩增多态性（sRAP）?思羌际酰?以45份初级种质代表的87份湘产百合种质为材料，通过Pop-Gene32、NTSYS-Pc（Version 2.1）等软件筛选湘产百合核心种质。结果表明：共获得多态位点218个，物种水平上多态性比例78.42%；通过对SRAP信息进行遗传多样性分析，使用逐步聚类取样法和分层抽样法筛选出15份核心种质，占收集资源总数的17.2%；t检验表明，核心种质的有效等位基因数、Nei’s遗传多样性指数、Shannon’s信息指数在0.05水平上与初始种质差异不显著，说明核心种质能很好地代替初始种质。 　　关键词：湖南省；百合；核心种质；遗传多样性；SRAP；种质资源 　　中图分类号：S682.2+90.24 文献标志码：A 文章编号：1002―1302（2016）01―056―04 　　湖南省为我国百合主要产区之一，百合在湖南省各地均有分布，以湘西自治州龙山县的龙山百合、邵阳市隆回县的龙牙百合种植区域最广。百合集药用、食用、观赏用途为一体，具有很高的经济价值。面对日益增长的百合需求，保护和利用百合种质资源极为重要。近年来，种质资源研究在国内外兴起，核心种质作为种质资源群体研究和利用的切入点，开展相关研究可以避免遗传上的重复，从而保存丰富的遗传变异，是提高种质资源利用率的有效途径，但是核心种质研究大多集中在牡丹、烟草、水稻等作物上，湘产百合核心种质研究尚未见报道。依靠基因型信息处理获得的核心种质，主要通过简单重复序列（SSR）、随机扩增多态性DNA（RAPD）、ISSR、扩增片段长度多态性（AFLP）等分子标记方法来实现，这些方法具有准确、高效、不受外界环境以及基因间互作影响等特点，能被很好地用来构建核心种质。相关序列扩增多态性（sequence related amplified polymorphism，SRAP）是在RAPD基础上的升级，引物高度通用，比AFLP更能反映形态学变异和进化历史，同时该技术还被认为是在分子标记辅助育种中最可能被大规模应用的一种技术。本研究利用SRAP标记技术筛选湘产百合核心种质，以期为有效利用其优秀基因提供依据。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　87份百合种质采自湖南省各地区，根据地方品种来源进行分组，按约50%的总体取样比例抽取45份样本建立初级核心种质（primary core collection），采用SRAP分子标记信息数据。45份初级种质来源及分组信息见表1。 　　1.2方法 　　1.2.1分子标记方法 根据改良CTAB法提取湘产百合种质DNA，参照Ⅱ等的原则，并作适当改进获得反应体系。SRAP-PCR扩增反应体系为20μL，其中Mg2+浓度2.5 mmol/L，dNTPs浓度0.2μmol/L，引物浓度0.2μmol/L，Taq酶1U，模板DNA 50 ng。扩增程序：94℃预变性5 min；94℃变性1 min，37℃复性1 min，72℃延伸2 min，5个循环；94℃变性1 min，50℃复性1 min，72℃延伸2 min，35个循环；72℃延伸10 min，4℃保存；扩增产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳分离（0.5×TBE，80 V，100 min），凝胶成像系统观察、照相。 　　1.2.2核心种质构建方法 　　1.2.2.1逐步聚类取样法 采用逐步聚类随机取样法，根据45份样本建立的初级核心种质SRAP信息的不加权类平均法（UPGMA）聚类结果，删除遗传相似系数最大的2份种质中的1份（如组内只有1份遗传材料，则选取该遗传材料），将剩余种质再聚类；再从遗传相似系数最大的成对种质中删除1份。以此类推，直到代表性或核心种质数量达到要求。利用上述方法分别设定50%、35%、20%的取样比例，分别获得样本群P1、P2、P3。样本群P1（23个样本）编号：1、4、5、6、8、11、14、15、16、20、27、31、34、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45；样本群P2（15个样本）编号：1、4、8、11、20、27、34、36、37、39、40、41、42、43、45；样本群P3（9个样本）编号：1、4、11、20、27、34、37、40、43。 　　1.2.2.2分层抽样法 采用分组取样策略，参考黎毛毛等的方法并适当改进，组内及亚组内取样方法采用聚类、随机方法相结合。根据主产区域将45份样本建立的初级核心种质分为湘北、湘西北、湘西南、湘中南等4个区域组。 　　抽样方法1：按50%比例在各区域组抽取一定数量的种质构成取样组；在取样组内对SRAP信息进行遗传多样性和聚类分析，依据遗传相似性阈值划分为不同的亚组，在各亚组内随机抽取一定数量的种质构成样