DNA聚合酶Klenow片段3Sanger双脱氧链终止法基本-昆明医科大学.PPTVIP

许冰莹, 昆明医科大学法医学院 Tel:0871Email:bingying_xu@126.com; ;第六章 DNA序列多态性;;概述 人类基因组DNA碱基序列差异--不同个体间 最本质的遗传差异。 DNA序列多态性(sequence polymorphism) 在特定的基因座上不同个体的等位基因之 间由碱基序列差异构成的DNA多态性。 ;DNA测序技术发展历史;DNA自动测序;;第一节DNA序列测定及多态性分析;一.双脱氧核苷酸链终止法（Sanger ）;一.双脱氧核苷酸链终止法（Sanger ）;双脱氧链末端终止法测序基本原理示意图 ;What’s in the A Tube?;;;脱氧核甘酸与双脱氧核甘酸结构比较;Phosphodiester bond;;3.Sanger双脱氧链终止法基本方法 （Basic method of Sanger Dideoxy chain termination method） ;3.Sanger双脱氧链终止法基本方法 （Basic method of Sanger Dideoxy chain termination method）;3.Sanger双脱氧链终止法基本方法（Basic method of Sanger Dideoxy chain termination method）; Sanger双脱氧链终止法 （Sanger Dideoxy chain termination method）;How DNA Sequence Is Determined?;二.PCR循环测序技术（PCR cycle sequencing technology）;二.PCR循环测序技术（PCR cycle sequencing technology）;二.PCR 循环测序技术（PCR cycle sequencing technology）;;;;双脱氧核苷酸链终止法与PCR循环测序法的比较;三.DNA自动测序技术 （Automatic DNA sequencing technology） ;三.DNA自动测序技术 （Automatic DNA sequencing technology） ;2.DNA自动测序技术的基本步骤;3.DNA 自 动 测 序 技 术（Automatic DNA sequencing technology）;3.DNA 自 动 测 序 技 术（Automatic DNA sequencing technology）;四色荧光染料(BigDye)标记终止物;测序反应体系和条件（Sequencing reaction system and condition）;测序反应（ Sequencing reaction ）;电泳检测（Electrophoresisdetection） —3130型遗传分析仪;荧光检测（Fluorescence detection）;DNA自动测序结果（Automatic DNA sequencing results）;DNA自动测序结果（Automatic DNA sequencing results）;3.DNA自动测序技术的特点（ characteristics of Automatic DNA sequencing technology ）;双脱氧核苷酸链终止法与PCR循环测序法的比较;三种测序方法的比较;第二节等位基因特异性探针杂交技术 （ allele specific oligonucleotide ，ASO）;★2.核酸分子杂交 具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA），在一定条件下按碱基互补配对原则经过复性处理后，形成异源双链(heteroduplex)的过程。;一.概述;一.概述;二.斑点印迹（Dot blotting）;二.斑点印迹(Dot blotting); PCR-ASO分析技术（正向印迹杂交） ; PCR-ASO分析技术（反向印迹杂交）;;反向杂交;三.HLA-DQA1基因座;结果判读; 三.HLA-DQA基因座等位基因反向印迹杂交分型结果 ;四.法医学应用;五.ASO探针杂交技术的局限性 ;第三节扩增片段限制性长度多态性分析技术（ PCR-restriction fragment length polymporphism, PCR-RFLP ）;第三节扩增片段限制性长度多态性分析技术（ PCR-restriction fragment length polymporphism, PCR-RFLP ）;一.基本原理（Basic pri