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基于HPLC与NIRS指纹图谱分析不同形态乌药根 　　[摘要] 为了分析鉴别3种不同形态的乌药根，采用高效液相色谱和近红外光谱指纹图谱相结合的方法进行综合评价。将乌药纺锤根、直根和老根进行分组，建立其高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，并使用SPSS软件进行聚类分析；采集乌药近红外光谱（NIRS）图，运用判别分析法，建立乌药最佳定性分析模型。结果显示，乌药纺锤根和乌药直根相似度≥0.990，乌药老根相似度≤0.85；聚类分析和NIRS判别分析模型将乌药3个不同形态根清晰地聚为两类，界限明显。说明乌药老根与纺锤根、直根有很大的品质差异。HPLC和NIRS指纹图谱2种方法结合，能够快速准确地用于不同形态乌药根的鉴别。 　　[关键词] 乌药； 不同形态； 高效液相色谱； 近红外光谱； 聚类分析； 判别分析 　　乌药为樟科植物乌药Lindera aggregata（Sims）Kosterm. 的干燥块根，具有行气止痛，温肾散寒之功效，用于寒凝气滞、胸腹疼痛、气逆喘急、膀胱虚冷、遗尿尿频、疝气疼痛、经寒腹痛[1]。现代化学及药理研究表明，乌药中化学成分主要为挥发油、倍半萜类、生物碱类、黄酮类、甾体、单宁类等多种类型化合物，具有抗病毒、抗菌、抗肿瘤、镇痛、抗炎护肝、促进消化系统、兴奋心血管系统和中枢系统、防止糖尿病肾病等药理作用[23]。 　　乌药最早收录于陈藏器的《本草拾遗》，《日华子本草》、《汤液本草》、《本草求真》中均有记载。李时珍在《本草纲目》中将乌药列入香木类，属木部中品。《重修政和经史证类备用本草》记载：“乌药……根状似山芍药及乌樟根，色黑褐，作车毂纹，横生。八月采根，直根不用。”《本草图经》载：“乌药……根以作车毂纹，形如连珠者为佳。” 　　目前，各省市施行的中药炮制技术规范亦均记载乌药以块根入药。2015年版《中国药典》中明确规定块根呈连珠状、以质嫩、粉性大、横断面浅棕色者为佳，质老、不呈纺锤状的直根，不可供药用。笔者走访了浙江天台、衢州等几个乌药产区，当地加工有的一直沿用乌药仅以块根入药，而有的把乌药直根切片作乌药用。有学者也研究发现乌药直根的各指标也均符合《中国药典》要求[4]。而在乌药原药材中，以直根量最大，纺锤根量次之，老根最少。故考虑是否可以将直根也列为乌药药材的来源。 　　HPLC指纹图谱技术从宏观角度出发，对中药材的质量进行多元化、综合化评价。有学者采用HPLC指纹图谱对不同产地的乌药质量进行了比较[57]。近红外光谱（NIRS）是一种快速无损的绿色分析技术，可整体评价中药材质量，具有样品处理简单、无需试剂消耗等优点，已广泛用于中药质量控制与鉴别[813]。本文将2种技术联用，对不同形态乌药根的质量进行宏观评价分析，定性比较乌药纺锤根、直根和老根的质量差异，为合理利用乌药资源提供科学依据。 　　1 材料 　　1.1 仪器 　　戴安Ultimate3000高效液相色谱仪，配置包括四元梯度泵、在线真空脱气机、自动进样器、柱温箱、DAD检测器，变色龙色谱数据工作站（美国赛默飞世尔科技有限公司）；Agilent Eclipse XDBC18（4.6 mm×250 mm， 5 μm）色谱柱；ANTARISⅡ傅立叶红外光谱仪（美国赛默飞世尔科技公司），配有积分球、样品旋转台、样品杯、OMNIC光谱采集软件和TQ Analyst 8.0分析软件；数显电子恒温水浴锅（天津泰斯特仪器有限公司）；Al204电子分析天平（梅特勒托利多仪器有限公司）；BP210S 1/10万电子天平（Sartorius公司）；电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；数控超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）。 　　1.2 试药 　　乌药醚内酯（批号111568201204，纯度99.5%），购自中国食品药品检定研究院；甲醇、甲酸、三乙胺、盐酸、正己烷为分析纯（广东光华科技股份有限公司）；液相用甲醇、乙腈为色谱纯（美国TEDIA试剂有限公司）；水为娃哈哈纯净水。 　　1.3 药材 　　新鲜乌药采自浙江衢州等地，经浙江中医药大学中药饮片有限公司钱敏主管中药师鉴定为樟科植物乌药L. aggregata的块根。 　　2 方法和结果 　　2.1 乌药的处理 　　取新鲜乌药根，按不同形态分为纺锤根、直根和老根，切片，并摊薄阴干，得到乌药纺锤根10批（S1～S10）、直根10批（S11～S20）和乌药老根6批（S21～S26），打粉过80目筛，备用。 　　2.2 HPLC指纹图谱分析 　　2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取乌药醚内酯对照品8.43 mg，置于20 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液。精密量取5 mL对照品储备液，置于50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得41.15 mg