乙酰胆碱酯酶（TChE）测定试剂盒.PDFVIP

乙酰胆碱酯酶 （TChE）测定试剂盒 说明书修订日期：2016.06.20 Cat number：KGT037 Store at 4℃for 6 months For Research Use Only （科研专用） 一、 测定原理 乙酰胆碱酯酶 （True choline esterase）水解乙酰胆碱生成胆碱及乙酸，胆碱可以与巯基显色剂反应生成 TNB （对称三硝基苯，Sym-Trinitrobenzene）黄色化合物。根据颜色深浅进行比色定量，水解产物胆碱的数 量反应胆碱酯酶的活力。 二、 所需仪器 分光光度计、水浴箱、微量移液器。 三、试剂组成及配制 （50T/24 样） 组份 50T/24 样 保存温度 标准品 粉剂×3 支 4℃ 底物 粉剂×2 支 4℃ 显色剂储备液 3ml 4℃ 抑制剂 2ml 室温 透明剂 6ml 室温 生理盐水 60ml×2 室温 注意事项： 1、标准品：粉剂，可4℃保存6 个月。1μmol/ml标准应用液的配制：取标准品一支加生理盐水10ml 混 匀，现用现配。 2、底物：粉剂，可4℃保存6 个月。用时每支粉剂加生理盐水20ml，现用现配，4℃保存两周。 3、显色剂储备液：可4℃保存6 个月。用时以生理盐水1：9稀释，配成显色应用液。需多少配多少，也 可一次配成30ml，避光冷藏，保存期3个月。 4、抑制剂：2ml，打开后可以装在空的小塑料瓶内，室温保存6 个月。 5、透明剂：6ml，室温保存6 个月。天冷时会有沉淀或混浊，须在37℃水浴加热至透明后方可使用。 6、稳定剂：用时每支加 10ml 蒸馏水混匀，避光冷藏保存5 天。 四、操作 （一）、样品前处理 1、组织匀浆的制备：称取组织重量加9 倍生理盐水制成10%的匀浆，2500 转/分离心10 分钟，取上清 液待测。同时必须测蛋白，可用双缩脲法测蛋白。 2、血清 （浆）：取不抗凝或抗凝全血 1000-1500 转/分钟，离心8 分钟，取上层血清 （浆）。测时将血清 或血浆用生理盐水1：9稀释。 3、全血前处理：取0.1ml抗凝全血加生理盐水至 10ml，即按 1：99稀释，充分混匀。如果您的样本量 很少，可以减少取样量。例如取0.01ml 或0.02ml抗凝全血加生理盐水至 1ml或2ml。取a ml （一般取0.1ml）进行检测，每个样本取样前必须充分混匀。 （二）、操作步骤： 测定管 对照管 标准管 空白管 样本 （ml） a* 1μmol/ml标准应用液 （ml） a* 蒸馏水 （ml） a* 底物缓冲液 （ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 显色应用液 （ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 混匀，37℃准确反应6 分钟 抑制剂 （ml） 0.03 0.03