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多药耐药蛋白P糖蛋白研究进展 　　肿瘤细胞对化疗药物的耐受性是肿瘤治疗的主要障碍，也是多数肿瘤患者预后不佳的主要原因。有学者认为90%以上恶性肿瘤患者死亡在不同程度上与耐药因素有关[1]。肿瘤产生耐药与多种因素有关，如多药耐药基因的过度表达；谷胱甘肽解毒酶系统活性增高；DNA拓扑异构酶Ⅱ活性增高或性质发生改变；多药耐药相关蛋白基因表达增高等。其中由P-糖蛋白介导的多药耐药最为重要，本文重点介绍与P-糖蛋白有关的多种调控因素及其逆转多药耐药（multi resistance,MDR）进展。? 　　1 P-糖蛋白的结构与功能? 　　P-糖蛋白又称P-gp(p-glycoprotein),P-170，是由多药耐药基因(MDR1)编码的分子量为170 KD的糖蛋白，是Biedler于1970年发现的，Juliano于1976年首次命名的与肿瘤多药耐药有关的一种膜糖蛋白。人MDR1基因的cDNA全长4669 bp，其中第179~3840 bp之间为一个开放读框，起始密码为ATG，编码含有1280个氨基酸残基的多肽链，分子量约为140 KDa。该多肤链可以分为两个大致相同的同源部分，每部分含有6个穿膜的?螺旋结构(疏水区)和一个胞内亲水结构域。12个疏水区在膜内排列成6对，使P-gp多肽链嵌于细胞膜内。在胞膜外侧P-gp有3个N连接的糖基化位点，翻译后修饰加上去的糖链约为30 KDa，使得成熟的P-gp分子量为170 KDa。在细胞膜内侧，P-gp的两个亲水结构域各含一个ATP结合位点，分别在第426-433/541-551和1068-1075/1184-1196氨基酸残基之间[2]。? 　　关于P-gp功能单位，有学者提出“疏水真空清除器”(hydrophobic vacuum cleaner)模式，认为P-gp本身形成单一药物通道，具有药泵功能，并可在细胞内控测药物浓度，当药物进入细胞后，P-gp结合药物分子，同时其ATP位点结合ATP后释放能量使药物转移到细胞外，也可以直接从细胞膜排除药物，使细胞内药物浓度始终维持于低水平，细胞由此获得耐药性[3]。P-gp对药物的特异性很小，因此MDR细胞能对许多结构和作用机制不同的药物产生耐药。这些药物常具有较大的分子量，多呈脂溶性，能被动扩散进入细胞，易与P-gp结合，如阿霉素、长春新碱等许多脂溶性抗癌药。有学者研究表明钙调蛋白抑制剂及其他钙通道阻滞剂如nicardine可与P-gp结合，提高药物的细胞毒作用。这种作用是由于抑制了药物的外流，提高了细胞内的药物浓度，增加MDR细胞对抗癌药物的敏感性。因此有人推测，P-gp可能是钙离子通道的一部分，这也是钙离子拮抗剂作为化疗增敏剂的作用原理。目前大多数学者认为单分子P-gp就是一个功能单位，而westiein认为P-gp在膜内是以二聚体和四聚体方式存在的，以形成一个畅通的药物通道。? 　　2 P-糖蛋白的分布与调控? 　　P-gp分布于人的正常肝脏、肾脏和成人的肾上腺、胰腺、结肠、空肠，在孕妇的子宫分泌上皮腔和人胎盘中也有较高表达，在CD??34+?的多能祖干细胞中也有一定水平的P-gp表达。MDR1基因的表达受祖干细胞分化水平的形响，最原始的造血干细胞P-gp表达最高[4]。这说明P-gp并非是一种异常蛋白，它是人体内一种具有重要生理功能的转运蛋白，主要涉及正常组织的解毒、体内毒性物质的清除、激素的分泌、某些物质的转运以及参与正常组织细胞抵御外源性毒素损伤等。正常人体组织中，P-gp的表达存在着明显的个体差异性，即使是在同一组织中，P-gp的表达也有明显的异质性。不同组织来源的肿瘤中P-gp的表达水平有明显差别。来源于MDR1高表达组织的恶性肿瘤继续高表达MDR1基因，如结肠癌、肾细胞癌、肝细胞癌、肾上腺癌、嗜铬细胞瘤，胰腺癌、具有神经内分泌特征的非小细胞肺癌等。这些肿瘤在治疗前就高表达P-gp，因此对抗肿瘤药物具有天然耐药性。而许多未经治疗的肿瘤中mdr1 mRNA和P-gp的表达水平非常低，甚至不能检出，这类肿瘤主要包括非小细胞肺癌、食道癌、胃癌、前列腺癌、肉瘤等。乳腺癌、卵巢癌、非何杰金氏淋巴瘤、儿童急性淋巴细胞性白血病等开始对化疗药物敏感，但在化疗过程中或化疗结束后，其P-gp水平常显著增高而表现出获得性MDR[5]。在临床上，MDR1基因及P-gp的表达水平可用以判断肿瘤患者的预后。? 　　P-gp的表达受多种因素多种形式的调控。①通过MDR1 mRNA和P-gp水平增高，此时可以没有MDR1的扩增。Hu[6]等选择一株MDR1 mRNA和P-gp低表达的细胞系CEM/A7R，接触柔红霉素24 h内，MDR1 mRNA随着药物浓度的增加而递增，说明药物诱导在MDR的产生中起重要作用；②通过转录激活使MDR1 mRNA表