基于抑制血小板聚集活性检测血栓通胶囊质量控制研究.docVIP

基于抑制血小板聚集活性检测血栓通胶囊质量控制研究 　　[摘要] 通过建立血栓通胶囊（XST）体外抑制血小板聚集的生物活性测定法用于补充其质量控制方法。以体外抑制大鼠血小板聚集作用来考察血栓通胶囊的生物活性。以三七总皂苷、注射用血塞通冻干粉作为标准对照物质进行效价测定。研究结果发现血栓通胶囊对凝血酶诱导的血小板聚集具有显著抑制作用，并且呈现出剂量依赖关系。注射用血塞通冻干粉比三七总皂苷对照品体外抗血小板活性更稳定，适宜作为标准对照物质。采用“量反应平行线”法作为血栓通胶囊体外抗凝血酶诱导血小板聚集的生物效价检测方法，重复性较好（RSD 2.9%），样品检测结果均能通过可靠检验（偏离直线P0.05，偏离平行P0.05）。该研究建立的生物效价检测方法可以作为血栓通胶囊生物评价的质控方法之一。 　　[关键词] 血栓通胶囊； 血小板聚集； 生物活性测定法； 质量控制 　　中药的质量可控是保证中药安全、有效的重要基础。常用的中药质控方法包括药材的外观形状鉴别、化学定性鉴别、指标成分检测、化学指纹图谱等。虽然开展中药质量控制的理化分析技术发展很快，但仍存在一些共性问题，一方面，经常选用的含量高、容易控制的成分却未必是药效成分，难以与中药的药效建立直接的内在联系；另一方面，许多适应症完全不同的中药采用相同的含量测定指标，如芍药苷、黄芪甲苷、大黄素、绿原酸等，难以真正反映中药制剂的质量[1]。 　　事实上，中医药的临床疗效反映了中药的内在质量。生物活性测定是反映临床功效及效价的基本方法，结合中药及其制剂的主治功能或毒副作用，寻找在生物体（包括整体动物、器官、组织、细胞和生物标记物等）上的适宜反应，以比较其作用强度，可以直观地反映中药的特定品质和总体含量或效价。用生物活性指标评价中药质量早有记载。如在洋地黄、乌头、莨菪、麦角、海葱、大麻等也用生物检定测定其作用强度以指导用药，避免临床上使用的剂量不足或过量[2]。一些生物活性检测技术测定中药含量的方法开始收入药典等法定标准中，如《中国药典》2005年版一部中通过计算水蛭粉末的抗凝血酶活性进行含量测定；消栓肠溶胶囊[国家药品标准WS3571（Z67）2005（Z）]的效价测定方法借鉴了生物制品中酶效价测定方法[5]。 　　血栓通胶囊由三七总皂苷组成，具有活血祛瘀、通脉活络的效应。目前评价药物活血化瘀活性的方法有很多，常用的有体外抗血小板凝聚、黏附、释放功能等；抗凝功能检测，包括凝血因子检测、凝血酶时间测定（TT）、活化部分凝血酶法（APTT）等；动物实验包括125I标记栓块溶解法、体内动静脉旁路血栓模型、大鼠急性心肌缺血实验、小鼠急性脑缺血缺氧实验、小鼠体内血栓形成实验等。郭玉东等[3]建立了舒血宁注射液（银杏叶提取物）体外抑制血小板聚集的生物活性测定法用于补充银杏提取物的质量控制方法。主要以抑制家兔血小板聚集作用来考察显示舒血宁注射液量效关系和效价测定，标准物质选取了金纳多注射液。 　　生物活性检测进行药物质量控制，需要选择与临床适应症基本一致、简便易行、重复性好的方法。课题组开展了血栓通胶囊抑制ADP、胶原、花生四烯酸和凝血酶等诱导血小板聚集的预实验，结果显示相同剂量的血栓通胶囊对凝血酶诱导血小板聚集的抑制效应最强，并且具有较好的重复性。因此本研究采用量反应平行线法，测定血栓通胶囊抑制凝血酶诱导血小板聚集的活血化瘀生物效价用于药物的质量控制。 　　1材料与方法 　　1.1供血动物 　　SD大鼠，雄性，40只，体重240～260 g，SPF级，动物许可证号SCXK（京由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。 　　1.2试剂 　　血栓通胶囊（规格三七总皂苷100 mg/180 mg胶囊，珍宝岛药业，批；三七总皂苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号100870201002）；阿司匹林（中国食品药品检定研究院，批号100113201405）；EDTA（美国Amresco公司，批号0322）；注射用血塞通（冻干粉，规格400 mg珍宝岛药业，批号；凝血酶冻干粉（规格500 U，长春远大国奥制药有限公司，批；0.9%氯化钠注射液（石家庄四药有限公司，批号130731405），调节pH 7.2；枸橼酸纳（国药集团化学试剂有限公司，批；血小板洗涤液及ACD溶液为实验室自制。 　　1.3仪器 　　LBYNJ4型血小板聚集仪（北京泰利康信科技有限公司）；160C型医用离心机（北京白洋医用器械有限公司）；E3200H型电子天平（SHIMADZU）；BH2型显微镜（OLYMPUS）。 　　1.4药物配制 　　精密称取血栓通胶囊粉末600.1 mg，加入生理盐水5 mL量瓶定容，其中三七总