基于直立碳纳米管大面积金粒子DNA生物传感器用于早幼粒白血病维甲酸受体α融合基因检测.docVIP

基于直立碳纳米管大面积金粒子DNA生物传感器用于早幼粒白血病维甲酸受体α融合基因检测 　　摘要 基于直立碳纳米管上的大面积金粒子构建了新型的电化学DNA生物传感器，用于急性早幼粒细胞白血病PML/RARα 融合基因的检测。首先在直立碳纳米管电极表面溅射金粒子，采用自组装方法将巯基修饰的单链DNA固定到电极上，将氨基修饰的单链DNA和羧基化的CdTe量子点通过酰胺缩合反应生成CdTe修饰的DNA探针，通过与目标DNA的双杂交反应形成三明治结构，利用差分脉冲阳极溶出伏安法检测电极表面捕获的CdTe量子点，从而对DNA进行定量分析。结果表明，电极上Cd2+峰电流与目标DNA浓度（1.0×10 　　Symbolm@@ 12～1.0×10 　　Symbolm@@ 8 mol/L）的对数值呈线性关系，线性方程为ipa（μA） =1.626 + 0.132lgC（mol/L）（R=0.996），检出限为4.0×10 　　Symbolm@@ 13 mol/L（3σ）。传感器表现出良好的重现性和稳定性。 　　关键词直立碳纳米管；金粒子；急性早幼粒细胞白血病；DNA生物传感器；差分脉冲阳极溶出伏安 　　1引言 　　急性早幼粒细胞白血病（Acute promyelocytic leukemia，APL）是急性骨髓系白血病中一种严重危害人类健康的恶性白血病摘要 [1]，而早期诊断直接影响患者的治疗效果及生存质量。早幼粒白血病/维甲酸受体α（Promyelocytic leukaemia/retinoic acid receptor α，简称PML/RARα）融合基因是APL特异性的标志物， 对其检测有助于APL诊断，且对融合基因的定量也有重要意义。目前，APL的临床诊断方法，如SouthernBlot法、荧光原位杂交技术（FISH）和实时定量分析PCR方法，普遍存在局限性，如特异性低、灵敏度不高、操作繁琐、检测费用高等摘要 [2～4]，限制了在临床检测中的应用。 　　DNA生物传感器具有灵敏度高、检测成本低、操作简单等优点摘要 [5]，在流行病、遗传疾病、肿瘤临床检验和基因诊断等方面有很高的应用价值摘要 [6～9]。直立碳纳米管阵列（ACNTs）与无序碳纳米管相比，在导电性、比表面积和生物兼容性等方面具有更为突出的优势摘要 [10，11]，已被应用于生物传感器的研究摘要 [12～14]。Wang 等摘要 [12]通过有序自组装碳纳米管技术制备了DNA 生物传感器，该传感器比无序多壁碳纳米管的传感器具有更高的杂交效率和更高的选择性。Yang等摘要 [13]在直立碳纳米管修饰电极上制备了基于金纳米粒子和二氧化硅凝胶的生物传感器，测定了血红蛋白的直接电化学。本研究组前期的工作中，在直立碳纳米管电极上以重氮化固定环糊精，构建了基于主客体识别技术的DNA生物传感器摘要 [14]。 　　本研究在电极表面修饰的直立碳纳米管表面溅射大面积金粒子，通过自组装固定巯基修饰的DNA探针，与CdTe量子点修饰的DNA检测探针以及目标DNA形成三明治结构，构建一种新型的DNA生物传感器，通过阳极溶出法测定捕获至电极表面的CdTe量子点，用于PML/RARα 融合基因的检测。由于直立碳纳米管表面固定了大量的金粒子，以CdTe量子点作为杂交指示剂，结合阳极溶出法的放大作用，本传感器具有灵敏度高、制备简便、重现性好和稳定性高等优点。 　　2实验部分 　　2.1仪器与试剂 　　CHI660A电化学工作站（上海辰华仪器有限公司），采用三电极体系：直立碳纳米管阵列电极（直径d=2 mm）为工作电极，铂丝为对电极，Ag/AgCl为参比电极。JEOL S4800 FESEM型场发射扫描电子显微镜（日本JEOL公司）。 　　羧基化的CdTe量子点（深圳市中鼎盛投资有限公司，编号QDWS1L54001，粒径约3.0 nm）；1（3二甲氨基丙基）3乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC?HCl，上海延长生化科技公司）； N羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐（NHSS，上海生工生物技术公司）；牛血清白蛋白（BSA，SigmaAldrich公司）。其它试剂为分析纯，实验用水为超纯水（MilliQ，美国Millipore公司）。缓冲溶液：0.1 mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.0）； 0.1 mol/L NaAcHAc缓冲液（pH 5.2）。所用DNA序列由上海生工生物技术公司合成，具体序列见表1。 　　2.2实验方法 　　2.2.1直立碳纳米管阵列（ACNTs）电极的制备摘要 [14]用化学气相沉积法合成ACNTs 摘要 [15]，再用磁共振法在其上溅射一层金粒子摘要 [14]，用10% HF将直立碳纳米管阵列从石英基底上剥离，制成ACNTs工作电极。 　　2.2.2CdTe量子