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基于液体培养基白芨种苗离体快繁技术 　　摘要：针对白芨[Bletilla striata （Thunb.）Reichb.f.]种苗人工繁育存在的问题，介绍了一种基于液体培养基的白芨种苗离体快繁技术，比较了不同成熟度白芨种子离体培养的具体技术方案。该技术操作简便，成本低廉，能有效实现白芨组培苗的高效快速生产，适宜于进行规模化生产。 　　关键词：白芨[Bletilla striata （Thunb.）Reichb.f.]；组织培养苗；液体培养基；离体快繁 　　中图分类号：S567.23+9.1+2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2018）02-0080-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.02.020 　　Abstract： A rapid in vitro propagation technique based on liquid culture medium for artificial breeding of Bletilla striata （Thunb.）Reichb.f. seedling was introduced aiming at solving the current problems. The specific techniques for in vitro culture of B. striata seeds with different maturity were compared. As practice confirms， the technique was with simple operation and low cost， which can effectively realize the rapid and efficient production of B. striata tissue culture seedling， thus was suitable for large scale production. 　　Key words： Bletilla striata （Thunb.）Reichb.f.； tissue culture seedling； liquid culture medium； in vitro rapid propagation 　　白芨[Bletilla striata（Thunb.）Reichb.f.]为兰科（Orchidaceae）白芨属（Bletilla Reichb.f.）多年生宿根草本植物，根呈白色，数个相连，故名白芨，别名白及、连及草、甘根。白芨花大色艳，具有较高的观赏价值；同时白芨生有肥厚的肉质块状假鳞茎，是重要的中药材之一，具有收敛止血、消肿生肌的功效。随着白芨的持续开发，市场需求连年增长，价格逐渐上涨，致使野生资源私挖滥采严重，导致白芨野生资源濒临枯竭，现有的白芨资源受到严重破坏，已无法满足市场需求，因而也被国家列为重点保护野生药用植物之一[1]。在自然野生状态下，成熟的白芨种子呈粉末状，非常细小，开花授粉15周后的种子有胚率仅为59%左右，很少萌发成苗[2]，因此其种子自然萌发率极低，繁殖困难。目前人工繁育多采用分株繁殖，即将块茎切成小块种植，但繁殖系数低、消耗量大、大面积供种依然较为困难，难以满足大规模生产的需求[3，4]。采取植物组织培养技术，可在短时间内获得大量的白芨实生苗，是一种快速有效的繁殖方法，目前主要通过将种子撒播在添加激素的固体培养基上萌发，再生出无菌苗，或诱导原球茎、经增殖生根后进行快繁[4]，这要涉及4～5种以上的培养基，操作较为繁琐，且周期较长，最短在110 d内方能成苗移栽，相对生产成本较高[5，6]。为此课题组探讨了一种基于液体培养基的白芨种苗离体快繁技术，该技术选用液体培养基，用液体悬浮培养萌发种子，而不是常用的固体培养基表面萌发，其能有效地提高白芨种子萌发率，缩短白芨成苗时间，快速获得白芨幼苗，下面将该技术介绍如下。 　　1 未成熟白芨种子离体培养 　　1.1 种子表面灭菌及萌发 　　选取开花授粉15周后、未开裂的白芨蒴果（含种子），在成都农业科技?业学院园林园艺分院实验室超净工作台上用75%乙醇进行表面消毒30 s，去离子水冲洗1～2次。用解剖刀及镊子仔细剥开果实，将种子小心地抖落到无菌组织培养瓶中，加适量5%的次氯酸钠溶液（滴加1～2滴吐温-20）消毒20 min。用灭菌的50目细胞筛过滤种子；再用去离子水冲洗、过滤，反复4～6次，冲去表面残留的消毒液。将细胞筛上过滤的种子以MS+1.0 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖、pH 5.8的种子萌发液体培养基冲洗到三角瓶内，于25 ℃、100 r/min黑暗培养15-2