基于紫外分光光度法土壤过氧化氢酶活性测量.docVIP

基于紫外分光光度法土壤过氧化氢酶活性测量 　　【摘 要】土壤酶作为土壤中的重要成分，对其的研究能够较为准确的反映土壤生物活性，过氧化氢酶是其中非常重要的一种酶类，对其活性的测量有着重要意义。为了得到一种方便、可靠的测定方法，本文就基于紫外分光光度法的土壤过氧化氢酶活性的测量展开研究。结果表明，紫外分光光度法具有较好的重现性、稳定性，且操作简单，值得推广应用。 　　【关键词】紫外分光光度法；土壤；过氧化氢酶；活性 　　土壤酶活性可以有效地反映土壤生化反应强度，以及土壤肥力水平，而且土壤中的各种生化反应与养分转换大多都离不开土壤酶的参与。就其来源来说，土壤酶主要源自于各类微生物的活动以及植物的生长，对土壤的耕作、周边环境的改变都会在一定程度上影响其活性。过氧化氢酶，是其中非常重要的一种酶类，与生物的新陈代谢、生物分解密切相关，而在生物体中，其可以起到破坏过氧化氢的作用。因此，对过氧化氢酶的研究有着重要的应用价值，一直以来，众多学者都在努力探索一种简单、方便、准确的测量其活性的方法。本文就基于紫外分光光度法的土壤过氧化氢酶活性的测量进行研究，希望为相关领域的研究提供一定参考。 　　一、材料与方法 　　（一）材料 　　试验材料包括以下几种：红壤1、红壤2、山地黄壤和山地暗黄棕壤。材料取回后需挑出植物根系、碎石等杂物，等待自然风干后过1mm筛备用。 　　（二）方法 　　1.紫外分光光度法 　　过氧化氢酶的作用，可使过氧化氢分解为水和氧气。在样品中加入定量的过氧化氢，经过一段时间后，计算加入与剩余量之差即为与酶发生反应分解的过氧化氢，用以表示酶活性。过氧化氢（H2O2）在240nm处有强烈吸收，通过测定样品在此状态下的吸光度，就可得到过氧化氢的浓度。 　　称取样品2.00 g，添加40 ml蒸馏水，加入5 ml H2O2溶液，经过震荡20分钟。迅速添加铝钾矾1 ml，过滤于5 ml 1.5 mol L-1的硫酸溶液中。经滤干处理，将滤液在240 nm处测定吸光度As。同时做无土A0和无基质Ak对照。 　　2.高锰酸钾滴定法 　　称取样品2.00 g，添加40ml蒸馏水，加入5 ml 的H2O2溶液，经过振荡20分钟后加入1ml铝钾矾，过滤于盛有5 ml 1.5 M硫酸中，经滤干处理，吸取滤液25 ml，用高锰酸钾溶液滴定至紫色，同时做无土对照。 　　二、结果分析 　　（一）方法的重现性 　　称取20份红壤1样品，各2.00g，10份用于加基质的反应，另外10份用于无基质对照，同时做一份无土对照。根据测定方法处理溶液的吸光度后，取样25ml用高锰酸钾溶液处理，分别比较两种方法下的酶活性。 　　研究表明，两种方法测得的平均值极为接近，用t检验，两种方法得到的结果之间无明显差别（P=0.663）。在重现性上来看，高锰酸钾法的标准差、变异系数均高于紫外分光光度法。这表明后者的重现性要好于前者。 　　（二）稳定性 　　称取10份红壤1样品，各2.00g，5份加入过氧化氢，另外5份不加用于对照。严格按照顺序测算吸光度，之后分别放置2、3、4、11小时后进行测定。结果表明，时间对吸光度的影响不大，无论是哪一组，都无明显差别，这就表明在酸性环境下，过氧化氢非常稳定，吸光度无明显改变。 　　（三）硫酸加入方法的影响 　　称取20份红壤2样品，各2.00g，分别采取以下四种处理方法：第一种，加H2O2振荡后加酸迅速过滤；第二种，加H2O2振荡后直接过滤到盛有酸液的容器中；第三种，无基质对照加酸后过滤；第四种，无基质对照直接过滤到盛有酸液的容器中；每种重复5次。结果表明，不同的加入顺序对吸光度有很大影响。第一种方法，吸光度已超过了仪表的读数范围，难以测得数值；第三种方法，吸光度也超过了1，这已是无法测得酶的活性，该种方法下的溶液有颜色，就算是用容量法也对终点判定有很大影响，在有机质含量较高的条件下已无法滴定；第二种与第四种方法，其吸光度均在相应范围内，由此得到的酶活性之间无明显差别。 　　（四）铝钾矾的影响 　　称取30份红壤2样品，各2.00g，分别采取以下六种处理方法：加H2O2与不加H2O2的无基质对照。按振荡前加、振荡后加1ml铝钾矾和不加铝钾矾，各重复5次。结果表明，是否加入铝钾矾、采用何种方式加入都会对吸光度产生影响。不加铝钾矾时，过滤速度非常慢，溶液比较浑浊，因此不加铝钾矾的吸光度要高。加入顺序对有基质样品的吸光度有很大影响，振荡前大于振荡后的吸光度。加入顺序对无基质对照的吸光度无影响，各组吸光度无明显差别。 　　（五）不同土壤上的运用 　　取不同的土壤样品分别进行过氧化氢酶活性的测量，各重复5次。结果表明，不同土壤的过氧化氢酶活性的测量结果之间无明显差别，这证明了紫外分光光度法可应用于过氧化氢酶