大蒜素对H9c2细胞钠电流作用.docVIP

大蒜素对H9c2细胞钠电流作用 　　【摘要】 目的 观察大蒜素（Gar）对H9c2细胞钠电流的影响。方法 取培养大鼠心肌细胞系H9c2细胞， 采用全细胞膜片钳记录钠电流。观察Gar对钠电流和门控机制的影响。结果 Gar对INa的抑制效应呈电压依赖性。-30 mV时， 200 μmol/L Gar可使INa由（-98.4±5.6）pA/pF降低为（-66.5±5.3）pA/pF （P0.05）。结论 大蒜素可能通过减少钠通道激活， 降低钠电流。 　　【关键词】 大蒜素；H9c2细胞；钠电流；膜片钳 　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.27.192 　　【Abstract】 Objective To observe influence by garlcini （Gar） on H9c2 cell sodium current. Methods Sodium current in cultured H9c2 cells of rat cardiac muscle cell line was recorded by whole-cell patch clamp. Observation was made on influence by Gar on sodium current and gating mechanism. Results Inhibiting effect on INa showed its voltage dependency by Gar. With -30 mV， 200 μmol/L Gar decreased INa from （-98.4±5.6） pA/pF to （-66.5±5.3） pA/pF （P0.05）. Conclusion Garlcini can reduce sodium current by decreasing sodium channel activation. 　　【Key words】 Garlcini； H9c2 cell； Sodium current； Patch clamp 　　心律失常是最常见的心血管疾病之一， 而心肌细胞钠离子通道电流在心肌电活动中起着主要的作用。其不仅贡献动作电位的0相除极， 也决定着心肌细胞的有效不应期， 该通道突变可以导致Brugada综合征、LQT3和家族性房颤等多种遗传性心律失常[1， 2]， 钠通道也是一类抗心律失常药物的作用靶点。然而， 一类抗心律失常药物多具有副作用， 从而制约了它们的应用[3]。亟需寻找新的抗心律失常药物。Gar是一种从百合科植物大蒜鳞茎中分离出的具有多种生物学活性的化合物。在心血管疾病领域的应用越来越受到重视， 该成份可以改善缺血心肌的供养， 具有抗心律失常作用[4]。本文选择大鼠心肌细胞系H9c2细胞， 用全细胞膜片钳技术观察Gar对INa的影响， 以期为开发新的抗心律失常药物提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　1. 1 材料 胰蛋白酶、牛血清白蛋白、天门冬氨酸钾、丙酮酸钠、MgATP、HEPES、CaCl2、CdCl2、TTX均为Sigma公司产品；EGTA购自Fluka Biochemika；DMEM-F12培养基和胎牛血清购自美国 Gibico公司。 　　细胞外液（mmol/L）：NaCl 130， CaCl2 2， CsCl 5， MgCl2 1.2， HEPES 10和glucose 5， CsOH调pH至7.4。于细胞外液加入4-AP 5 mmol/L阻断Ito。 　　细胞内液（mmol/L）：CsCl 100、TEA-Cl 20、EGTA 10、Na2-ATP 5、HEPES 10， CsOH调pH调至7.2。 　　1. 2 H9c2细胞的培养 H9c2 心肌细胞由中山大学实验动物中心提供。在37℃、5% CO2 条件下培养于含有15%胎牛血清的 DMEM-F12培养基中。0.25% 胰蛋白酶消化细胞， 制成细胞悬液。将细胞接种在直径为1.4 cm的盖玻片上， 37℃培养贴壁。 　　1. 3 药物及应用 Gar购于上海禾风制药有限公司， 纯品是无色或淡黄色油状物， 相对分子质量为162。临用时用细胞外液制成终浓度， 细胞外恒流灌流方式给药。 　　1. 4 全细胞膜片钳记录 将Axon-700B膜片钳放大器（USA）同计算机连接。刺激信号及电压输入信号的采集应用Digidata 1550A数模转换器（USA）， 均由软件（pCLAMP10.4） 控制。GG-17玻璃毛坯经pp-83微电极拉制仪（Narishige Co. Japan）拉制成电阻为2.0～5.5 MΩ的电极。调节三维操纵器进行封接， 使封接电阻达1 GΩ， 吸破细胞