基因工程原理第四章幻灯片.pptVIP

第四章 载体 第一节  大肠杆菌质粒载体 质粒 原核生物染色体外的稳定复制体,因此可利用作为克隆载体。有时，也泛指所有的环状载体DNA。 质粒在琼脂糖电泳时，常呈三条带，迁移快慢从快到慢依次是：超螺旋、线性、开环。 质粒的分类 按是否携带促进细菌接合的转移基因(tra基因)，分为接合型和非接合型 按在单个细胞内的拷贝数，分为松弛型(多拷贝)和严紧型(低拷贝) 一般来说，接合型质粒相对分子量较大，拷贝数少；非接合型质粒分子量较小，拷贝数多 质粒的复制起始决定质粒的拷贝数 质粒具有两种调控起始的主要机制 1)通过反义RNA调控 现在大部分质粒载体(ori来自ColE1质粒)的拷贝数调控方式 2)通过关键蛋白调控 质粒克隆载体的理想特性 相对分子量小(易于操作、拷贝数高、利于出现单一酶切位点) 可以在宿主细胞内产生便于选择的表型特性(便于筛选) 存在多种限制性酶的单一位点区域，且最好位于易测表型基因上(便于克隆、筛选） pUC8载体 衍生自pBR322 含有复制起始位点(ori)和另两个基因：氨苄青霉素抗性基因和lacZ’基因 Lac筛选(蓝白斑筛选) 蓝白斑筛选：pUC质粒含LacZ基因，该酶能分解生色底物X-gal产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入LacZ基因后失活，菌株呈白色，称之为蓝白斑筛选。 pUC8等大