姜黄浸膏散对CCl4所致小鼠急性肝损伤保护作用研究.docVIP

姜黄浸膏散对CCl4所致小鼠急性肝损伤保护作用研究 　　摘要：为了考察姜黄浸膏散对CCl4所致的小鼠急性肝损伤的保护作用，采用不同剂量姜黄浸膏散（50、100、200 mg/kg）口灌给药小鼠一周，随后腹腔注射0.12% CCl4攻毒，观察小鼠血清中AST、ALT以及肝组织匀浆中SOD、CAT、GSH-Px和MDA的变化情况。结果显示，姜黄浸膏散能够显著降低CCl4所致肝损伤小鼠血清ALT、AST值（P0.01或P0.05），降低肝匀浆中MDA含量，增加SOD、CAT、GSH-Px活性，明显改善肝组织的病理变化。表明姜黄浸膏散对CCl4所致的小鼠急性肝损伤具有显著的保护作用。 　　关键词：姜黄浸膏散；CCl4；肝损伤；小鼠 　　中图分类号：S948；R285.5 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）02-0425-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.02.040 　　姜黄（Curcuma longa L.）是姜科姜黄属多年生草本植物，粉末可作药用。其主要成分为姜黄素，经研究表明具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗微生物、清除自由基、抗突变、保肝等多方面药理作用[1，2]。在肝脏疾病研究方面发现姜黄素可以通过抗炎、抗氧化、抗纤维化、抗肝癌等作用来发挥保肝护肝作用[3]。本试验以小鼠CCl4肝损伤模型为基础，考察姜黄浸膏散对CCl4引起的小鼠急性肝损伤的保护作用，为姜黄浸膏散在水产养殖中制剂化应用提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　雄性昆明小鼠，体重（20±2）g，购自湖北省疾病预防控制中心。 　　联苯双酯购自药店；姜黄浸膏散为实验室自制；谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。 　　1.2 试验分组及给药[4] 　　试验鼠被随机分为6组，即正常对照组、损伤组、阳性对照组（联苯酸酯，200 mg/kg）、3个给药组（按姜黄素计，剂量分别为50、100、200 mg/kg），每组10只小鼠，采取口灌给药（10 mL/kg），姜黄素、联苯双酯均溶于0.5%羧甲基纤维素钠溶液中，正常对照组和损伤组口灌生理盐水。给药10 d后除正常对照组外，其余各组小鼠均腹腔注射0.12% CCl4-橄榄油溶液（10 mL/kg），禁食不禁水。 　　1.3 样品制备及指标测定观察 　　腹腔注射24 h后，小鼠摘除眼球取血，放置析出血清后，4 000 r/min 离心10 min，收集血清置于 -20 ℃保存待测。将小鼠拉颈脱臼处死，取出肝脏，在预冷的生理盐水中漂洗，除去血液并用滤纸拭干，取0.2 g加入9倍预冷生理盐水进行匀浆，制备10%肝组织匀浆，然后以4 000 r/min 离心10 min，收集上清液，置于-20 ℃保存待测。血清ALT、AST活性、组织中SOD、CAT、GSH-Px活性及MDA含量均采用相应的试剂盒检测。 　　另取小块肝脏用10%中性甲醛固定，经洗涤、脱水、透明、渗透和包埋后，切成厚度为5 μm的薄片，HE染色，再经脱水和透明后用中性树胶封片，光镜下观察组织学特征。 　　1.4 数据处理 　　所有数据均采用x±s表示，采用SPSS17.0统计分析软件进行单因素方差分析和LSD多重比较分析。 　　2 结果与分析 　　2.1 姜黄浸膏散对急性肝损伤小鼠血清转氨酶活性的影响 　　由表1可见，CCl4攻毒后，损伤组小鼠血清中AST、ALT活性较正常对照组均极显著升高（P0.05）。表明姜黄浸膏散能够降低CCl4引起的小鼠血清中转氨酶活性的升高，并呈现剂量效应关系。 　　2.2 姜黄浸膏散对急性肝损伤小鼠肝组织中SOD、CAT、GSH-Px活性、MDA含量的影响 　　由表2可见，CCl4攻毒后，损伤组小鼠肝组织中SOD、CAT及GSH-Px活性较正常对照组均极显著降低（P0.05）。表明姜黄浸膏散能够有效缓解CCl4所致的小鼠肝组织SOD、CAT、GSH-Px活性降低及MDA含量升高。 　　2.3 姜黄浸膏散对急性肝损伤小鼠肝组织病理学影响 　　正常对照组小鼠肝小叶结构完整，肝细胞排列整齐，细胞结构完整，染色均匀，无细胞肿大及脂肪变性（图1A）。损伤组小鼠部分肝细胞出现水肿，细胞体积增大，胞质水分含量增多，呈现透明、淡染的现象；部分肝细胞出现脂肪变性（图1B）。阳性对照组和姜黄浸膏散不同剂量组小鼠仅少数肝细胞出现水肿及脂肪变性（图1C-F）。 　　3 讨论 　　小鼠CCl4急性肝损伤模型在形态学及病理学方面均与人类肝损伤极为相似，是经典的筛选和研究肝炎治疗药物的病