姜黄素对Aβ诱导AD大鼠β―APP和BACE1基因表达影响.docVIP

姜黄素对Aβ诱导AD大鼠β―APP和BACE1基因表达影响 　　摘要：目的 探讨姜黄素（curcumin）对老年性痴呆（Alzhelmersdisease，AD）大鼠海马区β-淀粉样前体蛋白（amyloid protein precursor，APP）和β-分泌酶（amyloidβsecretase1，BACE1）基因表达的影响。方法 采用Aβ1-40右侧海马区注射，制备AD大鼠模型，腹腔注射姜黄素给予治疗，采用RT-PCR法检测海马组织中β-APP和BACE1mRNA表达。结果 与正常组相比，模型组大鼠海马区神经元中β-APPmRNA和BACE1mRNA表达明显升高；与模型组相比较，姜黄素各剂量组β-APPmRNA和BACE1mRNA表达有不同程度降低，差异均有显著性。结论 姜黄素可通过对BACE1mRNA调控作用，阻断β-APP裂解进程，抑制Aβ在脑内生成与沉积，从而减少Aβ对神经元毒性作用。 　　关键词：姜黄素；老年性痴呆；β-APPmRNA；BACE1mRNA 　　研究表明，Aβ沉积是AD病理机制的中心环节和治疗靶点， AD治疗的关键在于如何抑制Aβ的生成和代谢。姜黄素能够有效地抑制Aβ的生成和聚集，从而改善AD学习记忆能力A减退和认知功能障碍 [1-2] ，但其具体机制仍然不明确，因此我们进行如下研究。 　　1 资料与方法 　　1.1 实验动物与分组 雄性SD大鼠，体重（250±20）g，清洁级，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，实验动物许可证号：SCXK黑2008004。给予充足水和食物常规饲养1w后进行实验。实验前经Morris水迷宫筛选，将大鼠随机分成正常组、假手术组、模型组、姜黄素组低剂量组和姜黄素高剂量组，每组10只。 　　1.2 主要试剂与仪器 纯度99%的姜黄素和Aβ1-40由Sigma公司生产；RT-PCR引物、Trizol RNA抽提试剂盒（Invitrogen）；逆转录试剂盒及PCR试剂和DNA marker（AKARA公司）；琼脂糖和溴化乙啶（美国Amresco公司）。 　　淮北正华生产的大鼠脑立体定位仪和Morris水迷宫；上海安亭TGL-16G台式离心机；德国Eppendorf公司5331型PCR扩增仪；美国UVP公司GDS-8000型凝胶成像分析系统；日本岛津紫外分光光度计。 　　1.3 模型制备 Aβ1-40用无菌生理盐水稀释后在37℃恒温箱中孵育7d，置于-20℃冰箱中保存备用。大鼠经10%的水合氯醛麻醉，固定在大鼠脑立体定位仪上，剪去头部毛发，常规消毒。参考《大鼠脑立体定位图谱》[3]沿大脑矢状线切开皮肤暴露出颅骨，注射点选择：前囟后3mm，中线向右旁开2mm，垂直进针3.5mm，缓慢注射Aβ1-40溶液2ul（10ug），5min内注射完，留针5min。颅骨孔用牙科泥封堵后，常规缝合头部的皮肤和局部消毒。假手术组除注入等量无菌双蒸水外其余处置同模型组。术后大鼠分别单笼饲养直至完全清醒。 　　1.4给药方法 在术后24h动物清醒后开始给药。姜黄素用二甲基亚砜（DMSO）溶解，低剂量组和高剂量组分别按150 mg/kg 、300 mg/kg浓度腹腔注射，正常组、假手术组、模型组大鼠分别腹腔注射等体积的二甲基亚砜，连续给药14d 。 　　1.5指标检测 各组大鼠在给药14d后麻醉，心脏灌注生理盐水后取出大脑，在冰上分离海马组织用于RT-PCR法检测大鼠海马区脑组织β-APPmRNA和BACE1mRNA表达。具体操作用严格按试剂盒说明书进行。 　　1.6 RT-PCR引物设计 β-APPmRNA引物序列：上游5-CCCATCAGGGACCAAAACC3，下游5GAAGGGCATCGCTTACAAACT3，长度218bp；BACE1mRNA引物序列：上游5TTCGTTTGCCCAAGAAA GTAT3，下游5GTAGGTATTGCTGAGGAAGGA3，长度219 bp；β-actin引物序列：上游5-CTCGCTGTCCACCTTCCA-3下游5GCTGTCACCTTCACCGTTC 3，长度256 bp。由大连宝生物设计合成。 　　1.8 数据统计 实验数据以均数±标准差（x±s）来表示，用SPSS18.0进行统计，采用单因素方差分析，各组间比较t检验，以P0.05为有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 BACE1mRN和β-APP mRNA在各组大鼠海马组织中表达 正常组和假手术组BACE1和β-APP mRNA表达呈现出较暗的条带，模型组大鼠海马区BACE1和β-APP mRNA表达明显增强，表现为高亮强度的条带。姜黄素低、高剂量组在不同程度上降低BACE1和β-APP mRNA的表达。结果见表1与图。 　　图1 　　3 讨论 　　AD最基本