第七篇 病毒学.docVIP

病 毒 病毒(virus)：是一类没有细胞结构但有遗传复制等生命特征，主要由核酸和蛋白质组成的大分子生物。是比细菌更小的专性细胞内寄生的微生物，大多数能通过细菌过滤器。 一、病毒的发现和研究历史 1886年，A. Mayer 发现具有传染性的烟草花叶病。 1892年，D. Ivanovsky烟草花叶病病原体能通过细菌滤器：他做了这样一个实验： 烟草花叶病—→ 细菌过滤器—→ 健康烟草植株发病（引起相同烟草花叶病） P、Ivanowski认为这种病原物是一种比细菌还小的微生物，把病毒等其他微生物分开是一个划时代的创举，遗憾的是把这种病原物称为是一种极小的细菌 1898年，M W Beijerinck对烟草花叶病病原体的研究结果： 能通过细菌滤器； 可被乙醇沉淀而不失去其感染性， 能在琼脂凝胶中扩散； 用培养细菌的方法不能被培养出来，推测只能在植物活细胞中生活； 比细菌小的具有传染性的活的流质（contagium vivum fluidum），并给以拉丁名(Virus)，被誉为“病毒学之父”。 1935年斯旦来（Stanly，USA）第一次提纯得到病毒的结晶，从此以后病毒学进入到分子水平。Bawden等证明烟草花叶病毒的本质为核蛋白； 1940年，Kausche首先用电镜观察到烟草花叶病毒颗粒； 病毒学（virulogy）：研究病毒（virus）的本质及其与宿主的相互作用的科学，是微生物学的重要分支学科。 二、病毒的特点和定义 特点： 1）不具有细胞结构，具有一般化学大分子的特征。 2）一种病毒的毒粒内只含有一种核酸，DNA或者RNA。 3）大部分病毒没有酶或酶系极不完全，不含催化能量代谢的酶，不能进行独立的代谢作用。 4）严格的活细胞内寄生，没有自身的核糖体，没有个体生长，也不进行二均分裂，必须依赖宿主细胞进行自身的核酸复制，形成子代。 5）个体微小，在电子显微镜下才能看见。 6）对大多数抗生素不敏感，对干扰素敏感。 病毒是一类既具有化学大分子属性，又具有生物体基本特征；既具有细胞外的感染性颗粒形式，又具有细胞内的繁殖性基因形式的独特生物类群。 其特点：超显微、没有细胞结构、专性活细胞内寄生的实体。 非细胞生物 （真）病毒：至少含核酸和蛋白质二种组分 亚病毒 类病毒：只含具侵染性的RNA组分 卫星病毒：具有核酸基因组，借助于Help病毒 卫星RNA：只含有不具侵染性的RNA组分，借助于Help病毒 朊病毒：只含蛋白质 三、病毒的宿主范围 病毒几乎可以感染所有的细胞生物，并具有宿主特异性 噬菌体（phage）、 植物病毒（plant viruses） 动物病毒（animal viruses） 四、病毒的培养和纯化 1、病毒的培养 病毒的培养：二元培养物法 1)噬菌体→细菌培养物→ 培养液→细菌培养液变清亮 营养琼脂平板→细菌平板成为残迹平板 若是噬菌体标本经过适当稀释再接种细菌平板，经过一定时间培养，在细菌菌苔上可形成圆形局部透明区域，即噬斑（plague）。如同对细菌计数一样，形成的噬菌斑也可用于对噬菌体的数目进行估算。 2）动物病毒 实验动物 鸡胚 多种细胞培养 大多数动物病毒感染敏感细胞培养能引起其显微表现的改变，即产生致细胞病变效应（cytopathic effect,CPE），例如细胞聚集成团、肿大、圆缩、脱落，细胞融合形成多核细胞，细胞内出现包涵体（inclusion body），乃至细胞裂解等。 若标本经过适当稀释进行接种并辅以染色处理，病毒可在培养的细胞单层上形成肉眼可见的局部病损区域，即蚀斑（plaque）或称空斑。 3）植物病毒 植物病毒→敏感植物叶片→产生坏死斑，或称枯斑 2、病毒的纯化 标准 病毒是有感染性的生物体→纯化的病毒制备物应保持其感染性 病毒具有化学大分子的属性→纯化的病毒制备物的理化性质应具有均一性 病 主要化学组成为蛋白质→蛋白质提纯方法 （盐析、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、凝胶层析、离子交换等） 毒 具有一定的大小、形状和密度 差速离心 梯度离心（超速离心） 第二节 毒粒的性质 毒粒（病毒颗粒）：病毒的细胞外颗粒形式，也是病毒的感染性形式。 即：一团能够自主复制的遗传物质 + 蛋白质外壳 + 包膜 蛋白质外壳保护遗传物质免遭环境破坏，并作为将遗传物质从一个宿主细胞传递给另一个宿主细胞的载体。 一、毒粒的形态结构 1、病毒的大小和形状 个体小，必需在电镜下观察；不同病毒的毒粒大小差别很大；毒粒的形状大致可分球形颗粒(或称拟球形颗粒)、杆状颗粒和复杂形状颗粒（如蝌蚪状，卵形）等少数几类。 2、毒粒的壳体结构 壳体或衣壳（capsid）：包围着病毒核酸的蛋白质外壳，由蛋白质亚基按对称的形