TMX基因与先天性肥厚性幽门狭窄易感性的研究-内科学专业论文.docx

广州医学院博士学位论文 广州医学院博士学位论文 TMX 基因与先天性肥厚性幽门狭窄遗传易感性的关联研究 PAGE PAGE 3 第一部分 中国汉族人群先天性肥厚性幽门狭窄临床特征 目的：探讨中国汉族人群先天性肥厚性幽门狭窄(CHPS)的临床发病特点， 为诊断、治疗,以及遗传易感基因研究和流行病学调查提供依据。 方法：对 307 例 CHPS 住院患儿的病历资料进行回顾性总结和分析，观察项 目包括患儿性别、发病年龄、体重变化、入院时电解质及动脉血气情况、B 超检 查结果及合并其他先天性疾病情况。将发病 10 天内治疗者列为早期组，而超过 10 天者列为晚期组，比较这两组动脉血气、电解质及日平均体重增加的差别。 结果：307 例患儿中男性 262 例，女性 45 例，发病年龄 1~351 天，去掉离 散程度较大者 6 例，其余 301 例平均发病年龄 23.8±13.0 天。患儿出生体重 1.6~4.5kg，平均 3.24±0.44kg；只有 1 对同卵双胞胎同时患病；合并其它先天 性疾病共 62 例（20.2%），前二位的是心血管和消化系统的先天性异常。幽门环 肌 B 超厚度 3~8mm，平均 5.4±1.1mm。早期组日平均体重增加明显大于晚期组， 而低钾血症、低氯血症及高碳酸血症发生率明显低于晚期组（P0.05）；血钠与 血 pH 值无显著性差异。 结论：中国汉族人群 CHPS 以男性为主，发病年龄为 3~5 周，幽门环肌厚度 5.4±1.1mm，合并其它先天性疾病比例较高，但家庭聚集发病少见。对于在出生 后 3~5 周内出现持续性呕吐患儿，应高度警惕 CHPS，并应尽快诊治，以减少低 氯低钾性碱中毒的发生，避免病情进一步恶化。 第二部分 CHPS 核心家系的全基因组芯片扫描分析 目的：从全基因组范围内探索 CHPS 发病相关基因。 方法：对由 19 个患儿及父母组成的核心家系，采用 Affymetrix 公司的 SNP 6.0 基因芯片进行全基因组芯片扫描，并用 golden helix 6.4 软件包的 FBAT 模块进行 分析，搜索与 CHPS 发病相关的基因及位点，对所发现的有显著性意义的位点， 进一步根据基因的功能及 P 值，选择候选基因。 结果：以 p 值达 10-5 为判定标准，总共发现 105 个 SNP 位点，通过初步筛选， 发现位于硫氧还蛋白相关跨膜蛋白 1 基因（thioredoxin-related transmembrane protein 1，TMX）上的多态性位点 rs7161242 与中国汉族人群 CHPS 发病相关联。 结论：TMX 基因的 rs7161242 位点与中国汉族人群 CHPS 发病相关联。 第三部分 TMX 基因与先天性肥厚性幽门狭窄遗传易感性的关联研究 目的:探索 TMX 多态性位点 rs7161242[c.492TG]及 rs7160810[c.648GA] 与 CHPS 发病的相关性。方法: 应用 PCR 及测序的方法，对多态性位点 rs7161242 及 rs7160810 进行基因分型，对 22 个核心家系进行 TDT 分析，进一步对 31 例 CHPS 患儿与 60 名正常对照采用病例-对照研究，来探索这两个 SNP 位点与 CHPS 发病的相关性，并利用在线软件对这两个 SNP 位点进行生物信息分析，研究其 多态性与 TMX 基因结构与功能之间的关系，进一步利用免疫组化方法来研究 TMX 基因表达与 CHPS 发病的关系。 结果: 测序结果验证了芯片扫描的准确性，未发现新的突变位点；患儿、父 母及正常对照者组内这两个多态性位点的 Hardy-Weinberg 平衡检验均 P0.05， TDT 检验提示多态性位点 rs7161242 的 G 等位基因及 rs7160810 的 A 等位基因的 均与 CHPS 发病相关，其 P 值分别为 2.0×10-4 和 5.699×10-5；连锁不平衡分析结 果提示：这两个位点的 r2 为 0.757，D值为 0.893，成紧密连锁。病例-对照研究 提示 rs7160810 位点 A 等位基因纯合子患病风险明显增加(OR=3.932，95%CI： 1.545~10.006， x2 =8.924，P=0.012)；rs7161242 位点 G 等位基因纯合子患病风 险明显增加(OR=4.222，95%CI：1.655~10.772， x2 =9.630，P=0.002)。在线分析 发现多态位点 rs7161242 位于第 6 外显子剪接受点(acceptor site) 区域