TNF-α和钙调蛋白激酶Ⅱ在大鼠心肌缺血后适应中的作用-内科学(心血管病)专业论文.docxVIP

华中科技大学硕士 学位论 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 10 PAGE 10 英文缩略词表及中文对照 英文缩写 英文全称 中文全称 CaMKII Calcium/calmodulin-de pendent protein kinaseⅡ 钙离子/钙调蛋白依赖性 蛋白激酶Ⅱ SR Sarcoplasmic reticulum 肌浆网 IR Ischemia/reperfusion 缺血/再灌注 IP Ischemia-postconditio ning 缺血后适应 TNFR TNFa receptor 肿瘤坏死因子受体 RhTNFR:Fc Recombined human TNFa receptor:Fc RT-PCR Real-time quantitative polymerase chain reaction PBS phosphate buffer saline 肿瘤坏死因子受体融合 蛋白 实时定量PCR 磷酸盐缓冲液 SDS lauryl sodium sulfate 十二烷基硫酸钠 SDS sodium dodecyl sulfate polyacryla-mide gel electropheresis 十二烷基硫酸钠聚丙烯 酰胺凝胶电泳 TNF-α和钙调蛋白激酶Ⅱ在大鼠心肌缺血后适应中的作用 摘 要 目的：探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和肌浆网钙调蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ） 在大鼠心肌缺血后适应发生机制中的作用及机制。 方法：SD大鼠随机分为5组(各组n=16)，包括假手术组（sham组）、缺血再灌注 组（IR组）、缺血后适应组（IP组）、重组人肿瘤坏死因子受体融合蛋白(rhTNFR:Fc)+ 缺血再灌注组(F+IR组）和rhTNFR:Fc+缺血后适应组（F+IP组）。结扎冠状动脉左前降 支建立心肌缺血再灌注模型和缺血后适应模型，测量各组心肌梗死面积；应用RT-PCR 技术对CaMKⅡ及TNFa的基因表达水平进行定量检测；使用Western blot对TNFa及 CaMKⅡ的含量进行半定量检测及检测CaMKⅡ活性的改变。 结果：(1)与Sham组比较，IR组梗死面积/缺血区面积及缺血区面积/总面积的 比值均显著增加（P0.01）；与IR组比较，IP组以及F+IR组和F+IP组均显著减少 （P0.01），其中F+IP的比值减少更为明显。(2) 与Sham组比较，其余各组心肌组织 TNF-αmRNA和蛋白均显著升高（P0.01）；与IR组比较，IP组以及F+IR组和F+IP组均 显著降低（P0.01），其中F+IP组降低更为明显。(3)与Sham组比较，IR、IP、F+IR组 及F+IP组心肌组织CaMKⅡ含量均显著降低（P0.01）；(4)与Sham组比较，IR组CaMKⅡ 活性显著降低（P0.01）；与IR组比较，IP组、F+IR组和F+IP组均明显升高（P0.01）， 其中以F+IP组升高最为显著。 结论：缺血后适应可通过降低缺血再灌注时心肌组织TNF-αmRNA和蛋白表达、 增加CaMKⅡ活性发挥心肌保护作用。 关键词：缺血后适应，心肌；TNF-α；钙调蛋白激酶Ⅱ Cardiac protective effect of ischemia-postconditioning are achieved by lowering TNF-α level and enhancing calcium/calmodulin-dependent protein kinase activity Abstract Aim: To study the changes of myocardial TNF-α, total sarcoplasmic reticulum CaMKII and its activity after ischemic postconditioning, and the relationship between TNF-α and SR CaMKII. Methods: SD rat hearts were randomly divided into five groups, including sham group(n=16), ischemia-reperfusion group(n=16), ischemia-postconditioning group(n=16), rhTNFR:Fc+ischemia-reperfusion group(n=16)and rhTNFR:Fc+ischemia-postconditioning group(n=16). The left anterior artery was ligated to