β-catenin转染表皮干细胞对糖尿病大鼠创面修复的影响-护理学专业论文.docxVIP

摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘 要 目的： 探讨体外培养条件下不同葡萄糖浓度对大鼠表皮干细胞（epidermal stem cells，ESCs）生长的影响，以及上调β-catenin 的表达对糖尿病（Diabetes Mellitus， DM）大鼠表皮干细胞增殖分化的作用，观察上调糖尿病大鼠表皮干细胞中 β-catenin 的表达对创面愈合的影响，为临床糖尿病创面的修复治疗奠定实验基 础。 方法： （1）取 SD 大鼠背部皮肤,采用酶消化法分离表皮和真皮，Ⅳ型胶原差速贴 壁法纯化表皮干细胞，建立体外培养大鼠表皮干细胞模型，随机分成 A 组(对照 组，葡萄糖浓度 5.5mmol/L)，B 组(葡萄糖浓度 10mmol/L)，C 组(葡萄糖浓度 20mmol/L)，D 组（葡萄糖浓度 40mmol/L）。显微镜下观察表皮干细胞的生长情 况，免疫细胞化学法检测表皮干细胞中β-catenin、Wnt1 的表达，使用图像分析 软件测量阳性细胞表达的平均积分光密度值。 （2） 制 备糖 尿病 大鼠 模型 (腹 腔一 次性 注射 链脲 佐菌 素 STZ，剂 量为 65mg/kg)，体外分离培养糖尿病大鼠表皮干细胞（ESCs），采用脂质体介导法将 pcDNA3.1myc-β-catenin 质粒转入 ESCs，同时设立脂质体对照组(转脂质体) 和 正常对照组，48h 后，免疫细胞化学法检测各组表皮干细胞中β-catenin 的表达； Western Blot 检测转染组与正常对照组表皮干细胞中β-catenin、Wnt1、CyclinD1 的表达情况。 （3）选取成模的DM大鼠15只，分别在脊柱两侧的背部制备直径约2.0cm的 全层皮肤缺损创面，即每只大鼠制备四个创面，并随机分为4组：A组(创面移植 羊膜负载转染的表皮干细胞组)，B组(创面移植羊膜负载未转染表皮干细胞组)， C组(羊膜组)和D组(空白对照组,不加任何干预)。观察创面愈合情况并测算创面 愈合率，采用HE染色进行组织病理学观察以及免疫组织化学法检测创面组织中 增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。 结果： （1）显微镜下观察，随着葡萄糖浓度的升高，细胞数量逐渐减少，生长速 度缓慢，胞体透亮度下降，活力降低；免疫细胞化学染色分析结果显示，C 组 II β-catenin(0.079±0.007）、Wnt1（0.083±0.004）和 D 组β-catenin（0.068±0.008）、 Wnt1（0.070±0.006）的表达均明显低于 A 组（β-catenin：0.096±0.123；Wnt1： 0.095±0.010），p0.01。 （2）免疫细胞化学结果显示,表皮干细胞转染重组质粒后β-catenin 的表达增 高，其表达水平高于脂质体组和空白对照组(p0.01)，脂质体组和空白对照组 组间差异无统计学意义（p0.05）。Western Blot 检测结果显示,转染组β-catenin、 Wnt1、CyclinD1 的表达均高于空白对照组(1.451±0.027vs1.094±0.026；1.084 ±0.078vs0.694±0.082；1.490±0.030vs0.807±0.019，p0.01）。 （3）A 组创面与 B、C、D 组相比较，其愈合时间缩短且创面愈合率提高， 组间比较差异有统计学意义(P0.01)，各组创面组织中均可见 PCNA 阳性细胞 表达，A 组的阳性细胞表达高于其他三组。 结论： （1）本实验条件下高浓度葡萄糖对体外培养大鼠表皮干细胞的生长有抑制 作用,且表皮干细胞中β-catenin、Wnt1 的表达减弱。 （2）采用脂质体转染法可成功将 pcDNA3.1myc-β-catenin 重组真核表达质粒 转入体外培养的糖尿病大鼠表皮干细胞；转染细胞β-catenin 的表达增高，并伴有 Wnt1、CyclinD1 的表达提高。 （3）上调糖尿病大鼠表皮干细胞中β-catenin 的表达可以促进糖尿病创面的愈 合。 关键词：糖尿病；表皮干细胞；转染；增殖分化；创面修复 III Ab Abstract ABSTRACT Objective: To explore the effect of different glucose concentrations on the proliferation of rat epidermal stem cells in vitro, and the impact of up-regulated β-catenin on the proliferation and differentiation of epidermal stem cells in diabetic rats. Observe β- catenin