β3GnT8在结肠癌细胞株转移中的分子机制及转录因子c-jun对β3GnT8的调控作用-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

β3Gn β3GnT8 在结肠癌细胞株转移中的分子机制及转录因子 c-jun 对β3GnT8 的调控作用 中文摘要 I I 中文摘要 目的：研究糖基转移酶β3GnT8 在结肠癌细胞侵袭转移中的分子机制及探讨转 录因子 c-jun 对β3GnT8 的转录调控作用。 方法：（1）Tranwell 细胞迁移和侵袭实验分别检测 LS-174T，SW620，SW480， LoVo 四株结肠癌细胞的迁移和侵袭能力。（2）Western-blot 检测β3GnT8 和 CD147 在四株结肠癌细胞中的蛋白表达水平。（3）流式细胞术和 Lectin-blot 检 测四株结肠癌细胞株中多聚乳糖胺链的表达水平。（4）将β3GnT8 的真核正义表 达载体及空载体、β3GnT8 干扰载体及对照载体通过脂质体分别介导转染至低转 移的结肠癌细胞株 LS-174T 和高转移的结肠癌细胞株 LoVo。（5）Western-blot 检测转染后 LS-174T 中β3GnT8 上调后和 LoVo 细胞中β3GnT8 下调后 CD147 糖 基化的改变。（6）Tranwell 细胞迁移和侵袭实验检测转染后 LS-174T 中β3GnT8 上调后和 LoVo 中β3GnT8 下调后，其细胞迁移和侵袭能力的变化。（7）克隆转 录因子 c-jun 全长基因序列并构建 c-jun 正义表达载体。（8）将 c-jun 真核正义 表达载体及空载体通过脂质体转染胃癌 SGC-7901 细胞，并通过 G418 筛选稳转 细胞株。（9）荧光显微镜观察转染荧光载体的细胞株，RT-PCR 和 Western-blot 检测 c-jun、β3GnT8 和 CD147 的 mRNA 和蛋白表达；流式细胞术及 Lectin-blot 检测 c-jun 对细胞糖蛋白中多聚乳糖胺链的表达影响；细胞增殖和细胞周期实验 检测转染 c-jun 后细胞增殖能力的变化。 结果：（1）Transwell 小室检测四株结肠癌细胞株中侵袭和迁移能力发现结肠 癌细胞株的转移能力从低到高依次为 LS-174T，SW620，SW480，LoVo。（2） Western-blot 检测发现随着结肠癌转移程度的增加，β3GnT8 和 HG-CD147 的表 达也随之升高，且β3GnT8 和 HG-CD147 的表达具有一定的相关性。（3）流式 细胞术和 Lectin-blot 实验结果显示，多聚乳糖胺链的表达也随着结肠癌转移程 度的增加而升高，并且被多聚乳糖胺链修饰的 CD147 糖蛋白的分子量大小在 49 kDa-90 kDa 之间。（4）LS-174T 中β3GnT8 上调后，与空白对照组相比， HG-CD147 的糖基化表达升高，其侵袭和迁移能力也增强；LoVo 细胞中β3GnT8 下调后，与空白对照组相比，HG-CD147 的糖基化表达下降，其侵袭和迁移能 力也降低。（5）构建 c-jun 正义表达载体，正反向测序结果在 NCBI 基因库中 BLAST 同源检索后显示正义载体中插入的 c-jun 目的片段正确（6）通过荧光显 中文摘要β3G 中文摘要 β3GnT8 在结肠癌细胞株转移中的分子机制及转录因子 c-jun 对β3GnT8 的调控作用 II II 微镜观察、RT-PCR、western-blot 等检测，c-jun 正义表达载体成功转入细胞并 得到稳定转染细胞株 SGC-7901。（7）Western-blot 检测发现，c-jun 基因上调后， 与对照组相比β3GnT8 和 HG-CD147 的表达均升高。（8）细胞增殖和细胞周期 实验检测发现，c-jun 基因上调后，与对照组相比细胞增殖能力增强。 结论：（1）四株结肠癌细胞株的转移能力从低到高依次为 LS-174T，SW620， SW480，LoVo。（2）β3GnT8、多聚乳糖胺链、HG-CD147 的表达水平随着结肠 癌转移程度的增加而升高，并且β3GnT8 与 HG-CD147 的表达呈正相关。（3） 在结肠癌细胞中β3GnT8 可能通过调节 HG-CD147 的糖基化水平来影响其侵袭 转移能力。（4）筛选出 c-jun 上调表达的 SGC-7901 稳转细胞株。（5）转录因子 c-jun 可能通过促进糖基转移酶β3GnT8 的表达来影响糖蛋白 HG-CD147 的糖基 化水平进而促进细胞的增殖能力。 关键词：β3GnT8，多聚乳糖胺链，HG-CD147，结肠癌细胞株，转移，转录 因子 c-jun 作 者：倪建龙 指导老师：吴士良 β3Gn β3GnT8 在结肠癌细胞株转移中的分子机制及转录因子 c-jun 对β3GnT8 的调控作用 英文摘要 PAGE PAGE III The mechanism of β3GnT8 in th