沙利度胺对人宫颈癌裸鼠肿瘤及新生血管形成影响.docVIP

沙利度胺对人宫颈癌裸鼠肿瘤及新生血管形成影响 　　[摘 要] 目的：探讨沙利度胺对人宫颈癌HeLa细胞裸鼠皮下种植瘤的生长及肿瘤组织内新生血管形成的影响。方法： 建立宫颈癌裸鼠荷瘤模型，分为4组，每组10只。1）沙利度胺低剂量组：100mg?kg-1?d-1，0.2ml腹腔注射；2）沙利度胺中剂量组：200mg?kg-1?d-1，0.2ml腹腔注射；3）沙利度胺高剂量组：400mg?kg-1?d-1，0.2ml腹腔注射；4）对照组：0.5%羧甲基纤维钠0.2ml腹腔注射。给药2周后，观察各组裸鼠体重、计算肿瘤抑制率，采用免疫组化法检测移植瘤组织中血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF）以及微血管密度（Microvessel Density，MVD）的变化。结果：用药2周后，各组裸鼠体内肿瘤抑制率呈现剂量依赖性，各组比较，差异有统计学意义（P0.05）；实验组中VEGF及MVD的表达均低于对照组，与对照组比较，差异有统计学意义（P0.05）。结论：沙利度胺对宫颈癌Hela皮下移植瘤的生长具有抑制作用，其作用可能与抗新生血管形成有关。 　　[关键词] 沙利度胺；人宫颈癌细胞；微血管密度；血管内皮生长因子 　　中图分类号：R737.33 文献标识码：A 文章编号：2095-5200（2016）05-015-03 　　DOI：10.11876/mimt201605006 　　宫颈癌是严重危害妇女健康和生命的最常见恶性肿瘤之一，其发病率及病死率在我国呈上升趋势，且日趋年轻化[1]。传统手术与放化疗是治疗宫颈癌的主要手段，但治疗效果有限，因此寻找新的、有效治疗手段至关重要。近年来，靶向治疗在临床实践中日益取得显著效果。它以肿瘤细胞分子的特征性改变为作用靶点，在发挥抗肿瘤作用同时、减少对正常细胞损伤。最近研究显示，沙利度胺具有广泛免疫调节作用和抗血管形成作用[2-3]，这一曾使上万名婴儿肢体畸形的药物再次引起人们重视。本研究旨在观察沙利度胺对Balb/c裸鼠宫颈癌Hela细胞皮下种植瘤抑制作用，为其在应用于宫颈癌治疗提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 主要试剂 　　沙利度胺购自江苏常州制药厂，生产批号以0.5%羧甲基纤维钠（CMC-Na）配成适当浓度，用于动物实验。小鼠抗人VEGF、CDl05单克隆抗体和即用型SABC法免疫组化试剂盒购自北京中山生物技术工程公司。 　　1.2 动物及细胞株 　　Balb/c裸鼠，体重20g左右，无特殊病原菌（SPF）条件下饲养。人宫颈癌细胞株Hela，复苏后接种于Balb/c裸鼠传代。 　　1.3 裸鼠荷瘤模型的建立及实验分组 　　无菌条件下，在每只裸鼠左侧腋部皮下注射0.2 mL人宫颈癌Hala细胞悬液（1×107个/mL）。当移植瘤直径达到8mm开始给药。随机将荷瘤鼠分为4 组，每组10只。正常对照组：每只腹腔注射0.5%羧甲基纤维钠0. 2mL。其余3组腹腔内注射不同剂量沙利度胺：低剂量组：100mg?kg-1?d-1，0.2mL；中剂量组：200mg?kg-1?d-1，0.2mL ；高剂量组：400mg?kg-1?d-1，0.2mL；4组均给药2周，每周2次，共注射4次。 　　1.4 抑瘤率测定 　　给药2周后颈椎脱臼处死动物，称取肿瘤重量（m），计算抑瘤率。抑瘤率=（对照组平均瘤重-给药组平均瘤重）/对照组平均瘤重× 100%。取出皮下种植瘤，用10%甲醛固定后制作石蜡切片。 　　1.5 移植瘤组织中VEGF和MVD的免疫组化检测 　　移植瘤标本经固定、包埋、切片后，按免疫组化SABC法进行染色，检测移植瘤组织中VEGF和CD105的表达。操作步骤严格按试剂说明书，PBS代替一抗作阴性对照。结果判断标准：①VEGF以胞膜或胞质出现棕黄色均匀颗粒的为阳性细胞。在400倍视野下随机选取 10个视野，分别计数每个视野内的阳性细胞数，计算阳性细胞的百分比：66%为强阳性（卅）。②MVD计数方法：40倍视野下选取5个微血管密集区，200倍视野下计数CDl05标记的毛细血管和微小血管，取其平均值代表MVD。 　　1.6 统计学方法 　　利用软件SPSS 14行单因素方差分析，P0.05为差异具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 4组裸鼠荷瘤抑瘤率比较 　　给药2周后，各组裸鼠体内肿瘤的重量呈现剂量依赖性降低；并计算其抑制率，结果显示，沙利度胺低剂量组、沙利度胺中剂量组、沙利度胺高剂量组抑瘤率分别为24.13%、43.52%、52.67%，与对照组相比裸鼠荷瘤明显缩小。且沙利度胺高剂量组抑瘤作用最显著为52.67%，各组比较，差异有统计学意义（P0.05）。见表1。 　　2.