第八篇 病原学诊断及防治.pptVIP

第八章 病原学诊断与防治 第一节 细菌学诊断 包括； 细菌学诊断——检测病原菌及其抗原，产物或核酸 血清学诊断——检测患者血清中特异性抗体 一、病原菌检测 标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。 根据致病菌在不同病期的体内分布和排出部位，采取不同标本。 应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应加入拮抗剂。 尽可能采集病变明显部位的材料。 标本必须新鲜，采集后尽快送检。 送检过程中要采取适当的保存方式。 标本做好标记，详细填写化验单，保证各环节的准确无误。 第二节 血清学诊断 人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价（滴度）的升高。因此，用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取病人的血清进行试验，故称为血清学诊断(serological diagnosis)。 血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者的抗体效价比前者升高大于等于4倍时方有意义。 常用方法：直接凝集试验、乳胶 凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、ELISA。 第二节 病毒学诊断 二 病毒的分离培养与鉴定（virus isolation and determination） （一）病毒的分离 方法 动物接种 选择易感动物及接种部位，观察发病情况 鸡胚培养 不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。 细胞培养：分离病毒最常用的方法 （1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。 （2）二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞。 （3）传代细胞—能在体外无限传代的细胞多由癌细胞或二倍体细胞突变而来。 病毒在培养细胞中增殖的指标 细胞的变化 （1）出现细胞病变效应（CPE）：即某些病毒在细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、聚集、坏死、脱落等） （2）形成细胞融合（多巨核细胞） （3）形成包涵体：某些病毒在细胞浆或核内增殖后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。（病毒增殖场所） 红细胞吸附 干扰现象 细胞代谢改变（pH） （二）病毒的数量与感染性测定 （三）新分离病毒的鉴定 核酸类型、理化性状、形态、血清学鉴定、基因测序和生物对比。 三、病毒感染的血清学诊断 用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体以诊断病毒性疾病（中和实验、补体结合实验、血凝抑制实验、凝胶免疫扩散等） 四、 病毒感染的快速诊断 (一)?? 形态学 电镜和免疫电镜——直接观察病毒 光镜—— 大病毒 和包涵体 （三） 检测病毒特异性IgM抗体 检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染或证明病毒复制。 （四） 检测病毒核酸 1 核酸杂交 ?? 斑点杂交（dot hybridization） ?? 原位杂交（in site hybridization） ?? DNA印迹杂交（Southern blot） ?? RNA印迹杂交 （northern blot） 2 核酸扩增 聚合酶链反应 （polymerase chain reaction，PCR DNA） 连接酶链反应（ligase chain reaction，LCR） 反转录PCR（Reverse transcrptase PCR，RT—PCR (RNA) 3 基因芯片技术（gene chip） 第三节 真菌学诊断 第四节 特异性预防与治疗 死疫苗 活疫苗 类毒素 新型活疫苗 基因工程疫苗 重组载体疫苗 二、 人工被动免疫 抗毒素 抗菌血清 胎盘球蛋白、丙种球蛋白 细胞免疫制剂 两种人工免疫的比较 三、细菌感染的治疗 抗菌药物种类（抗生素及人工合成化学制剂） 主要作用机制 影响细胞壁合成 影响细胞膜功能 影响细菌蛋白合成 影响细菌核酸合成 四、病毒感染的治疗 药物治疗 核苷类药物——抑制病毒基因复制 ——抑制病毒基因转录 蛋白酶抑制剂 天然药物（中草药） 其他药物（金刚烷胺） 干扰素及干扰素诱生剂治疗 基因治疗（反义寡核苷酸、抑制病毒复制） 免疫治疗（特异性抗体、免疫调节剂、治疗性疫苗等。 五、真菌的治疗 各种癣症——外用抗真药（易复发） 深部真菌病——除去诱因，提高免疫力，用抗真菌药物（副作用大） * * 标本采集与送检原则 致病菌的检验程序 标本 直接涂片染色镜检 分离培养与鉴定 病原菌抗原检测 其它检测 形态、结构、染色性 涂片镜检 菌落特征 生化反应 药敏试验