α-蒎烯抑制HepG2细胞增殖及相关机制研究-免疫学专业论文.docxVIP

广东药学 院学位论文原能性声明 本人郑重声明: 本人所呈交的学位论文， 系我个人在导师的指 导下 进行研究工作所取得的成果 。除文中巴特别加以栋注和致谢的地方外乡 不包含其它令人或机构已经发表或撰写过的研究成果。对本研究做出贡 献的其它个人和集体，均 已在文中明确说明和致谢。 本人充分意识 到本 明的法律结果究全由本人或担。 学位论文作者签名: 扣街巷 日期: tl!; 年 。附加 学位论文使用授权的声明 本人完全了解广东药学院有关保留和使用学位论文的规定，学校有 权保 留和向有关部门或机 构，送交本论文的复印 件和 电子!跤，允许论文被 查阅和借阂。学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库乡 可以采用影印、缩印或其它复印手段保存和汇编本学金论文。 保密论文在解密后适用本声明。 论文作者签名: 义和?生 论文耕签名: 53言 5 期: ?。句。工月k 目 录 摘 要 I ABSTRACT IV 引 言 1 第一部分 研究背景与立题依据 4 HYPERLINK \l _TOC_250001 一、α-蒎烯药理作用及其抗肿瘤机制研究概况 4 二、立题依据与研究内容 11 第二部分 实验研究 14 HYPERLINK \l _TOC_250000 第一章 α-蒎烯对肿瘤细胞增殖的影响 14 1 材料与方法 14 2 结果 20 3 讨论 23 第二章 α-蒎烯对 HepG2 细胞周期的影响 26 1 材料与方法 26 2 结果 28 3 讨论 31 第三章 α-蒎烯对 HepG2 细胞核中 γH2AX 焦点形成的影响 33 1 材料与方法 33 2 结果 35 3 讨论 36 第四章 α-蒎烯对 HepG2 细胞周期相关蛋白表达的影响 39 1 材料与方法 39 2 结果 47 3 讨论 49 总结与展望 53 附 录 54 攻读硕士学位期间发表的论文 55 致 谢 56 α-蒎烯抑制 HepG2 细胞增殖及相关机制研究 硕士研究生：朱福鸿 专 业：免疫学 导 师：张 萃 摘 要 1 研究目的与意义 α-蒎烯是一种无色透明液体，含有特殊的双环双键结构，具有较高的反应活性 与反应多样性。近年来，有关α-蒎烯的药理作用得到了越来越多的关注，有学者发 现荷瘤小鼠在富含α-蒎烯的环境中，肿瘤体积比对照组明显减小，说明α-蒎烯对 肿瘤细胞的生长具有抑制作用。虽然α-蒎烯抗肿瘤作用有了一些相关报道，但其作 用机制仍不够明确，为了探讨α-蒎烯对肿瘤细胞抑制作用及其相关机制，我们设立 了α-蒎烯抑制肿瘤细胞增殖及相关机制研究课题，以此证实α-蒎烯在作用 HepG2 细胞过程中分子通路。 α-蒎烯主要是从松科植物松油脂中分离得到的，我国的松节油含量非常丰富。 为了让丰富的资源得到更有价值的利用，研究α-蒎烯的药理作用前景广阔，尤其在 抗肿瘤机制研究上的深入，更有利于α-蒎烯的扩大利用。 本实验目的首先对α-蒎烯抑制肿瘤细胞增殖作用进行筛选，在此基础上探讨 其抗肿瘤的相关机制，该研究结果将为α-蒎烯的深入研究提供基础。同时旨在为抗 肿瘤药物的开发、扩大应用等提供理论和实验依据。 2研究方法 I 2.1α-蒎烯对肿瘤细胞增殖抑制作用筛选 本研究选取了肝癌 HepG2 细胞、大鼠胶质瘤 C6 细胞和胃癌 SGC-7901 细胞为实 验对象，利用不同浓度的α-蒎烯分别作用于肿瘤细胞 12h 和 24h 后，采用 MTT 法检 测α-蒎烯对肿瘤细胞的增殖抑制率并绘制抑制曲线；结晶紫染色法对α-蒎烯作用 肿瘤细胞之后细胞的数量变化，从中选取α-蒎烯作用最敏感的 HepG2 细胞进行后续 细胞周期与相关机制的研究。 α-蒎烯对 HepG2 细胞周期的影响 以前期工作为基础，筛选出的 HepG2 细胞为实验对象，采用不同浓度α-蒎烯分 别作用 12h 和 24h 后，在光学显微镜下观察细胞形态变化，并利用流式细胞术检测 α-蒎烯作用于 HepG2 细胞周期各个时相的分布情况。 α-蒎烯对 HepG2 细胞核中 γH2AX 焦点的影响 为了探讨α-蒎烯对肿瘤细胞 HepG2 抑制的分子机制，首先观察对肿瘤细胞 DNA 损伤的作用，主要探讨 DNA 损伤过程中的有关的分子γH2AX 的变化，通过免疫荧光 染色法来检测细胞核中 γH2AX 焦点的生成情况。 α-蒎烯对 HepG2 细胞相关蛋白表达的影响 在探讨α-蒎烯对 HepG2 细胞相关蛋白焦点影响基础上，采用 western blotting 技 术 检 测 不 同 浓 度