α2A肾上腺素能受体在脓毒症诱导的大鼠心脏血管内皮细胞活化中的作用-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

暨南大学博士学位论文α2A 暨南大学博士学位论文 α2A 肾上腺素能受体在脓毒症诱导的大鼠心脏血管内皮细胞活化中的作用 万方数据 万方数据 中文摘要 目的： 我们先前的研究表明，?2A 肾上腺素能受体（?2A-AR）阻断剂 BRL44408 可提高 脓 毒 症 大 鼠 的 生 存 率 、 改 善 脓 毒 症 大 鼠 的 心 功 能 并 降 低 心 脏 肿 瘤 坏 死 因 子 -? （TNF-?）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）与血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）的表 达，但其作用靶点尚不明确。业已证明，血管内皮细胞上存在?2A-AR。显然，BRL44408 降低心脏 TNF-?与黏附分子的表达可能与其作用于心脏血管内皮细胞从而抑制脓毒 症诱导的心脏内皮细胞活化相关。因此，本研究分别观察了?2-AR 激动剂和/或?2A-AR 阻断剂对脓毒症大鼠心脏、内毒素（LPS）灌流的离体心脏及培养的心脏微血管内皮 细胞产生 TNF-?、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和黏附分子的影响，进一步探讨 ?2A-AR 在脓毒症心脏血管内皮细胞活化中的作用与相关机制。 方法: 1. 通过盲肠结扎穿孔术（CLP）复制脓毒症大鼠模型，用 Western blot 观察 CLP 对 大鼠心脏组织中?2A-AR 的表达量有无影响，并进一步通过免疫荧光染色技术对 ?2A-AR 进行定位。 2. 用 Western blot 分析和免疫荧光染色方法观察?2A-AR 阻断剂 BRL44408 对脓毒症 大鼠心脏组织及心脏血管内皮 TNF-?、ICAM-1、VCAM-1 和 iNOS 表达的影响。 3. 通过免疫荧光染色技术观察?2-AR 的激动剂盐酸右美托咪啶（DEX）对脓毒症大 鼠心脏血管内皮 TNF-?、ICAM-1、VCAM-1 和 iNOS 表达的影响，并观察两种 不同剂量的 DEX 对脓毒症大鼠生存率的影响。 4. 采用 Langendorff 离体心脏灌流技术，观察 LPS 和/或?2-AR 激动剂 B-HT 933 对 离体大鼠心功能的影响；用 ELISA 法检测灌流液中 TNF-?的浓度；荧光定量 PCR 法检测心脏组织中 TNF-?、ICAM-1 和 VCAM-1 mRNA 的表达；免疫荧光染色 技术观察离体心脏灌流 2 h 后心脏内皮细胞上上述炎症介质的表达。 I 5. 培养心脏微血管内皮细胞，通过免疫荧光染色技术进行鉴定、并观察?2A-AR 在 心脏微血管内皮细胞上的表达；用 1 μg/mL 的 LPS 刺激内皮细胞，通过荧光定 量 PCR 法观察?2-AR 激动剂 B-HT 933 和/或?2A-AR 阻断剂 BRL44408 对 LPS 刺 激后 2 h 内皮细胞中 TNF-?、ICAM-1 和 VCAM-1 mRNA 表达的影响；通过 Western blot 分析观察?2-AR 激动剂和/或?2A-AR 阻断剂对 LPS 刺激 0.5 h 后心脏 微血管内皮细胞中 I?B?、p38 MAPK、JNK 和 ERK 磷酸化的影响。 结果: 1. CLP 诱导 6 h 对大鼠心脏组织?2A-AR 的表达量无明显影响；心脏组织冰冻切片 免疫荧光染色显示，心脏血管内皮细胞上存在?2A-AR。而肺组织冰冻切片免疫 荧光染色显示，肺血管内皮上未见?2A-AR 的表达。 2. ?2A-AR 阻断剂 BRL44408 可降低 CLP 术后 6 h 大鼠心脏组织中 TNF-?、ICAM-1、 VCAM-1 和 iNOS 的表达；免疫荧光染色结果显示，与 CLP 组相比，?2A-AR 阻 断剂 BRL44408 处理的脓毒症大鼠心脏血管内皮细胞上上述炎症细胞因子的表 达也相应减少，而 BRL44408 处理并不影响脓毒症大鼠肺血管内皮上 ICAM-1 和 VCAM-1 的表达。 3. ?2-AR 的激动剂 DEX 处理的 CLP 组，CLP 术后 6 h 心脏血管上 TNF-?、ICAM-1、 VCAM-1 和 iNOS 的表达明显强于 CLP 组；40 μg/kg 的 DEX 对脓毒症大鼠死亡 率无显著影响，但腹腔注射 80 ?g/kg 的 DEX 可显著增加脓毒症大鼠的死亡率。 4. ?2-AR 的激动剂 B-HT 933 可加重 LPS 灌流诱导的大鼠离体心脏心功能障碍；在 灌流早期，B-HT 933 与 LPS 共同灌流组，灌流液中 TNF-?的浓度显著高于 LPS 单独灌流组；LPS 灌流后大鼠心脏组织中 TNF-?、ICAM-1 和 VCAM-1 mRNA 的表达显著高于对照组，而 B-HT 933 显著增加了 LPS 诱导的 TNF-?、ICAM-1 和 VCAM-1 mRNA 的表达；LPS 灌流 2 h 后，心脏免疫荧光染色结果显示，