应用自动质谱退卷积定性系统和保留指数分析马尔康柴胡地上地下部分与北柴胡挥发油成分差异.docVIP

应用自动质谱退卷积定性系统和保留指数分析马尔康柴胡地上地下部分与北柴胡挥发油成分差异 　　[摘要] 采用自动质谱退卷积定性系统（automated mass spectral deconrolution and identification system，AMDIS）和保留指数方法分析地方习用品马尔康柴胡地上、地下部分与药典收载北柴胡挥发油GC-MS的总离子流图谱，对其成分进行定性并测定相对含量。结果表明马尔康柴胡与北柴胡挥发油成分种类有一定相似性，均有较高含量的抗炎镇痛活性成分氧化石竹烯，提示马尔康柴胡全草作为地区习用品，用于感冒发热等，具有一定科学依据。 　　[关键词] 马尔康柴胡； 柴胡； AMDIS； 保留指数； 挥发油； 定性； 相对含量 　　柴胡为常用中药，除《中国药典》2010年版收载的2个来源（伞形科植物柴胡Bupleurum chinense DC.或狭叶柴胡B. scorzonerifolium Willd.的干燥根）外[1]，柴胡属20余种植物在我国不同地区作为柴胡地区习用品入药[2]。 　　马尔康柴胡B. malconense的干燥全草是《四川省中药材标准》2010年版收载的地方习用品“竹叶柴胡”的来源之一[3]，产自四川阿坝州，主要为野生，因其价格低廉，使用广泛，用量较大。马尔康柴胡与药典收载柴胡不仅品种不同，且药用部位亦不同，但所载功能与主治却和药典收载柴胡基本一致，其科学性有待验证。 　　柴胡挥发油是其疏散退热作用的主要活性成分[4]。本文采用拟自动质谱退卷积定性系统（automated mass spectral deconrolution and identification system，AMDIS）和保留指数分析方法，对马尔康柴胡地上、地下部分的挥发油成分与北柴胡进行比较研究，为马尔康柴胡是否具有柴胡治疗感冒发热的物质基础，且其地上、地下部分是否可同等入药提供科学依据。 　　1 材料 　　Agilent 7890A/5975C GC-MS 气相色谱质谱联用仪，色谱柱HP-5MS 5% Penyl Methyl Siloxane（0.25 mm×30 m，0.25 μm），质谱图匹配的谱库 NIST08 MS database，匹配一化学工作站MSD ChemStation E. 02.01.1177，AMDIS（美国安捷伦公司）。正己烷、无水硫酸钠为分析纯，C8-C20系列正构烷烃标准溶液（mixture no. 04070）购于Fluka Chemika。 　　马尔康柴胡药材由作者采自四川省阿坝州汶川县，北柴胡购自成都市北京同仁堂药店，经成都中医药大学卫莹芳教授鉴定前者为马尔康柴胡B. malconense的全草，后者为柴胡B. chinense的干燥根。 　　2 方法 　　2.1 挥发油提取方法 取药材粉末（过2号筛）各50 g，置于1 000 mL圆底烧瓶中，加蒸馏水300～500 mL，浸泡2 h。随后安装挥发油提取器，加热回流6 h，得淡黄棕色澄明油状液体，静止1 h，后读数（mL）。加入2 mL正己烷稀释后，转移出来。加入适量无水硫酸钠，于5 ℃静置24 h脱水。将脱水后的挥发油装于螺口小瓶密闭，于5 ℃保存，以备测定。 　　2.2 GC-MS测定方法 色谱条件：初始温度40 ℃，保持3 min，以8 ℃?min-1的速率升至120 ℃，以2 ℃?min-1的速率升至200 ℃，以6 ℃?min-1的速率升至260 ℃，保持3 min。载气为He，流速1 mL?min-1。分流比20∶1，进样量1 μL。进样口温度280 ℃，溶剂延迟4.00 min。质谱条件：电离方式EI源，电子能量70 eV，离子源温度230 ℃，扫描范围50～400，扫描速度2.11 s?dec-1。测定北柴胡（根）与马尔康柴胡地下、地上部分的总离子流谱图（TIC），见图1～3。 　　3 数据分析方法 　　3.1 重叠峰拆分 中药挥发油成分复杂，应用GC-MS分析挥发油得到的TIC图谱中存在大量的重叠峰。工作站软件中带有AMDIS，它基于模型峰的算法，把性状与保留值完全相同的碎片峰重新组合，去掉其他的干扰峰，进而构建一张比较“纯净”的谱图[5]。这种提纯谱图的功能，可以有效的拆分重叠峰，进而准确的对化合物定性。 　　选择某一段TIC谱图，运行AMDIS，可初步得出这段TIC中化合物数目，对应各化合物特征碎片峰可将重叠峰进行分离。然后对相应扫描点的提纯谱图与图谱库对应的匹配化合物进行比对、分析，确定其结构[6]。 　　举例说明，见图4，由图4-a可见，通过运行AMDIS的run命令后，18.51～18.73 min有7个化合物；选择18.560 min处对应化合物的“纯化”谱