南医微生物实验课程(肥达、肠道等).pptVIP

微生物与免疫学实验（五） 肥达试验 原理：用已知的伤寒沙门菌菌体（O）抗原和鞭毛（H）抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清做试管或微孔板凝集实验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。 操作：肥达试验（试管凝集反应） 器材：试管6支/人，试管架1个/2人 吸管1支/人，标签1个/人 已知： 伤寒H抗原、O抗原 （4人/组） 甲型副伤寒H抗原 乙型副伤寒H抗原 待检：病人血清（1:10稀释） 三、吲哚（靛基质）试验 有些细菌分解色氨酸 生成吲哚（靛基质），与 加入的二甲基氨基苯甲醛 反应生成玫瑰吲哚呈玫瑰 红色为阳性；黄色为阴性。 肠道杆菌（G—） SS培养基 双糖铁培养基 生化反应表 Albert染色 作业 示教片：肠道杆菌、其他细菌、真菌 肥达试验：原理、步骤、结果、分析 第6管 均匀混浊 ＋ 少量凝集 ＋＋ 细菌部分沉于管底，液体半澄清，凝集 呈颗粒状 ＋＋＋ 大部分凝集，液体轻度混浊，凝集块较大 ＋＋＋＋ 全部凝集，液体澄清，大片凝集块 以出现＋＋凝集的血清最高稀释倍数为该血清抗体效价 O达到1:80，H达到1:160 H甲或H乙达到1:80或以上有诊断意义 结果判断 血清稀释度 菌液 1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 伤寒H 伤寒O 甲副H 乙副H 记录结果 *吸管放桶，试管放锅 * * 球孢子菌、组织胞浆菌、芽生菌和孢子丝菌等。这些真菌在体内或在含有动物蛋白的培养基上37 ℃培养时呈酵母菌型，在普通培养基上25℃培养时则呈丝状菌。 有些真菌可因环境条件的改变，而两种形态发生互变，称为二相性。(dimorphic) 主要内容 一、录像：真菌 二、操作：肥达试验 三、示教：肠道杆菌 其他细菌 真菌 0.5 ml生理盐水 1 2 3 4 5 6 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5ml血清 1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 对照 加菌液0.5ml/管（6→1），震荡混匀，43℃水浴1.5 h，观察结果 一、糖发酵试验 由于细菌各自具有不同的酶系统，故对糖（醇）类的分解能力不尽相同。 产酸产气 — 指示剂变色，小倒管内有气泡； 以＋ 表示 产酸 — 指示剂变色；以＋表示 不能分解 — 指示剂不变色；以－表示 指示剂为酸性复红 细菌生化反应 二、硫化氢试验 硫化氢遇铅盐或铁盐形成黑色硫化铅或硫化亚铁沉淀物。 四、尿素酶试验 有些细菌具有尿素酶，能分解尿素形成大量的氨，使培养基PH上升，而变成碱性，使含有酚红指示剂的培养基呈红色为阳性；不变色为阴性。 肠道杆菌的鉴定 标本增菌培养 接种SS平板 双糖铁培养基初步鉴定 其他生化反应鉴定 血清学鉴定 有菌 可疑的乳白色菌落 胆盐 枸橼酸盐 煌绿 乳糖 蛋白胨 中性红 抑制杂菌生长 被非致病菌分解产酸 被致病菌分解产碱 酸：红 碱：黄 上层 （固体） 下层 （半固体） 乳糖 硫酸亚铁 酚红 葡萄糖 - - - - - 变形 - - -/+ - 伤寒 - - - - - - 痢疾 - - - 大肠 靛 尿素 H2S 蔗 甘 麦 乳 葡 白喉棒状杆菌：G+ 一端或两端膨大，排列不规则，常呈栅栏状或英文字母