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微流路芯片技术应用及前景展望 　　摘要： 微流路芯片主要是以生物化学和分析化学为基础，以微机电加工技术为依托，以微管道网络为结构特征，把整个化验室的功能，包括采样、稀释、加试剂、反应、分离、检测等集成在微芯片上。阐述微流路芯片技术的材料与制作，以及在各领域的应用和展望。 　　关键词： 微流路芯片；材料与制作；应用；展望 　　中图分类号：TN492文献标识码：A文章编号：1671－7597（2011）0410038－01 　　 　　1 概述 　　微流路芯片主要是以分析化学和分析生物化学为基础，以微机电加工技术为依托，以微管道网络为结构特征，把整个化验室的功能，包括采样、稀释、加试剂、反应、分离、检测等集成在微芯片上。它与微阵列芯片（即生物芯片）组成一个完整的微型全分析系统。微流控芯片把整个实验室的功能，包括样品处理、化学反应、分离和检测等集成在芯片上，且可多次使用，因此具有更广泛的适用性。每个芯片可用于多个病人而不是一个病人一块芯片，每块芯片至少可重复使用20次，因此比微阵列芯片更为经济耐用。 　　微流路芯片能够如此迅速发展，主要得益于以下四方面原因[1]：① 微流控芯片在微分析的成功应用（高效液相色谱、气相色谱、毛细管电泳），引起研究者们对微流控芯片在其它应用方面的兴趣；② 冷战结束后，各国为预防他国与恐怖分子的生化威胁，加大了对微流控芯片等生物分析手段的研究投入；③ 分子生物学的高速发展，对分析方法的通量、灵敏度和精确度提出了更高要求，进而促进微流控芯片的发展；④ 微电子的发展。用于制作微电子芯片的相关技术，如影印石版术，可直接应用于制作微流控芯片。 　　2 材料与制作 　　由于微电子加工的光刻技术和化学湿腐蚀技术的成熟，最早应用于微流控芯片的材料是玻璃和石英。但在玻璃和石英的微流控芯片的制作过程中，需要用真空溅射或蒸发沉积的金属镀膜技术，所以整个过程技术复杂，步聚多，因而不易于大规模使用。近年来，有机材料已广泛的取代了玻璃和硅，有机材料具有和玻璃一样的光学特征，并且其成本低廉，制作简单，因而大大促进了微流路芯片的推广使用。目前，应用最广的有机材料是PDMS，PDMS具有良好的光学透性，可用压模法和注模法制槽，更重要的是它具有弹性，这一点使它可以很好与其它组分结合，如阀门和泵。当然，当系统需要较高的化学或热稳定性时，就必须以硅或玻璃为基质。微流路的制作方法因基质而异。玻璃的微流路主要采用光刻和化学湿腐蚀工艺刻槽，其融合技术有高温融合法、阳极融合法和化学融合法。有机材料的制作方法有注模法、压模法和激光刻蚀法，其融合方法相对于玻璃，条件温合，操作简便。如PDMS可通过自然封接方法融合。此外，采用氧等离子体照射两片PDMS的表面后立即封接，可实现两片PDMS的永久粘接[2]。 　　3 应用 　　目前，微流路芯片技术的应用越来越广泛，最初主要用于氨基酸分析、核酸片段的分离分析和核酸的测序。现在已经应用于蛋白质分析、免疫分析、酶分析，并已出现微流路芯片用于分离分析小分子化合物的相关报道。 　　3.1 细胞分析 　　利用微流路结构和流体动力学，可以对红细胞、白细胞和血小板进行分辨和计数。利用微流路装置，可以在流动过程中对红细胞黏弹性行为进行细胞力学研究。在长度为人毛细血管范围内的微通道阵列和生理流动条件下，可以研究白细胞与其生理环境间的相互作用。 　　Inoue等研制了一种芯片细胞培养系统，由室的阵列组成，在每个室中，单个细胞或细胞群通过可透过膜与外部环境分隔开，介质可以很容易地进行交换，而且室的大小是可变的。哺乳动物细胞和神经细胞都实现了在PDMS微流路芯片微室中的培养。 　　3.2 核酸分析 　　核酸分析是微流路芯片的主要用途之一，相关报道和应用也比较多。微流路芯片的核酸分析可以分成两个部分，一是核酸限制性酶切片的分离分析，一般用于检测DNA突变；二是DNA测序分析。核酸分析采用的分离模式一般为毛细管凝胶电泳，常用的分离介质为羟乙基纤维素和聚丙烯酰胺等。 　　Liu S.R.等[3]将玻璃芯片微通道表面先用线性聚丙烯酰胺衍生化涂布，减少电流渗，以聚丙烯酰胺作为分离介质，测定500个碱基的DNA序列，分析时间不到10min，分析准确达到99%，同时对分离基质、温度、通道尺寸和进样等参数进行了优化研究。 　　3.3 氨基酸和蛋白质分析 　　传统的蛋白质分析过程包括了：细胞中蛋白的提取、通过1D或2D凝胶电泳来分离可观测蛋白、切除蛋白谱带或在胶上消化蛋白、对相应的肽混合物进行质谱分析，这个过程相当漫长，而且工作量大。微流路芯片技术具有可改善蛋白质分析的发展、自动化、花费和通量的潜力，目前，大多数用于蛋白质分析的微流路都是采用基于芯片来分离蛋白、结合质谱进行鉴定的模式。 　　色谱和电泳是两种主要的蛋