阻断hedgehog信号通路对hepg2.2.15细胞增殖和迁移的影响-effects of blocking hedgehog signaling pathway on proliferation and migration of hepg 2.2.15 cells.docxVIP

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2018-09-10 发布于上海
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阻断hedgehog信号通路对hepg2.2.15细胞增殖和迁移的影响-effects of blocking hedgehog signaling pathway on proliferation and migration of hepg 2.2.15 cells

遵义医学院硕士学位论文黄继锦遵义医学院硕士学位论文黄继锦万方数据万方数据阻断 hedgehog 信号通路对 HepG2.2.15 细胞增殖和迁移的影响摘要目的：探讨Hedgehog信号通路在肝癌细胞HepG2.2.15增殖、迁移中的作用。方法：培养肝癌细胞HepG2.2.15，用5μmol/L、15μmol/L、25μmol/L环耙明处理 HepG2.2.15细胞24h、48h、72h，采用MTT检测环耙明对细胞增殖的影响；EDU法检测细胞DNA合成情况；划痕试验和transwell实验检测细胞迁移能力；Real-timePCR法检测细胞中Gli1、MMP-9 mRNA表达情况。结果：用5μmol/L、15μmol/L、25μmol/L浓度的环耙明处理HepG2.2.15细胞24h、 48h、72h后，MTT检测结果显示细胞增殖速度减慢，与空白组相比差异具有统计学意义（p0.05)；EDU法检测结果显示25μmol/L的环耙明作用于细胞24h、48h、72h后， HepG2.2.15细胞的DNA合成率较空白对照组降低(p0.01)；划痕试验结果显示，15μ mol/L、25μmol/L浓度的环耙明能抑制细胞的迁移，与对照组相比差异具有统计学意义（p0.05)；Transwell实验结果显示，5μmol/L 环耙明作用于HepG2.2.15细胞12h、 24h后，穿膜细胞数与对照组相比明显减少（p0.05）；Real -time PCR法实验结果显示5μmol/L、15μmol/L、25μmol/L环耙明处理组与对照组相比，Gli1、MMP-9 mRNA 表达水平明显降低（p0.05)。结论：不同浓度环耙明能抑制HepG2.2.15细胞的增殖，减少HepG2.2.15细胞的DNA合成率；并能降低细胞的迁移能力，其机制可能与HepG2.2.15细胞中Gli1、MMP-9 mRNA 的表达水平下降有关。关键词：Hedgehog信号通路；肝癌；增殖；迁移 3 The role of Hedgehog signaling pathway in proliferation and immigration of HepG2.2.15 cell Abstract Objective：To investigate the roles of Hedgehog signaling pathway in prolifera- tion and immigration of HepG2.2.15 cell. Methods: HepG2，HepG2.2.15 cells were divide into blank group,and the low, median and High concentration of cyclopamine treatment groups,which was treated with the Concentrations of cyclopamine were 5μmol/L,15μmol/L,25μmol/L,respectively. After 24h,48h,72h, The proliferation of HepG2.2.15 cell was detected by MTT.The cellular DNA synthesis were detected by EdU. The invasive ability was measured by Boyden chamber invasive models.The migration ability was measured by scratch test. The expression levels of Gli1,MMP-9 mRNA were measured by rea1-time PCR. Results：1. MTT assay results showed that the cyclopamine treatment groups with the concentration of 5 μ mol/L、15μmol/L、25 μ mol/L was significantly reduced cell proliferation compared with the control group,which the difference was statistically significant (p0.05). 2.EdU detection results showed the cyclopamine treatment groups decreased the cellular DNA synthes