紫玉盘内生真菌arthrinium sp.次级代谢产物研究-study on secondary metabolites of endophytic fungus arthri nium sp. from purple jade disk.docxVIP

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2018-09-10 发布于上海
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紫玉盘内生真菌arthrinium sp.次级代谢产物研究-study on secondary metabolites of endophytic fungus arthri nium sp. from purple jade disk.docx

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紫玉盘内生真菌arthrinium sp.次级代谢产物研究-study on secondary metabolites of endophytic fungus arthri nium sp. from purple jade disk

广东药学院硕士研究生学位论文广东药学院硕士研究生学位论文 PAGE PAGE III *人所里交的学位论文，系我个人在导师的指导 F 避除文中己特别规l以标位和致谢的地 !i外·不包璋的研究成果·对本研究做出员献的英 lij !飞目录摘要Ⅳ [Abstract]Ⅵ 第一章序言1 1.1 引言1 1.2 植物内生真菌次级代谢产物研究现状2 1.2.1 抗肿瘤活性次级代谢产物2 1.2.2 抗菌活性次级代谢产物5 1.2.3 抗病毒活性次级代谢产物10 1.2.4 抗氧化活性次级代谢产物13 1.2.5 酶抑制剂活性次级代谢产物16 1.2.6 其他活性次级代谢产物18 第二章目标菌株 A092 的筛选及鉴定 22 2.1 材料22 2.2 试剂22 2.3 仪器22 2.4 方法23 2.4.1 菌株的分离23 2.4.2 菌株鉴定23 2.4.3 菌株发酵液粗提物的制备23 2.4.4 菌株发酵液粗提物的 TLC 化学筛选 24 2.4.5 菌株发酵液粗提物的抗肿瘤活性24 2.4.6 菌株发酵液粗提物的抗氧化活性25 2.4.7 菌株发酵液粗提物的络氨酸酶抑制活性25 2.5 结果26 2.5.1 各菌株发酵液粗提物的薄层层析分析结果26 2.5.2 各菌株发酵液粗提物的活性测试结果27 2.6 讨论27 第三章 Arthrinium sp.A092 次生代谢产物的初步分离 30 3.1 材料30 3.2 试剂30 3.3 仪器30 3.4 方法30 3.4.1 培养基30 Arthrinium sp.A092 的发酵培养 31 Arthrinium sp.A092 粗提物的提取 31 Arthrinium sp.A092 发酵液粗提物的初步分离 32 Arthrinium sp.A092 菌丝体粗提物的初步分离 32 Arthrinium sp.A092 菌丝体初组分的活性研究 32 3.5 结果与分析33 3.5.1 抗菌活性结果33 3.5.2 抗氧化活性结果34 第四章 Arthrinium sp.A092 次生代谢产物的分离纯化及结构鉴定 36 4.1 材料36 4.2 试剂36 4.3 仪器36 4.4 Arthrinium sp.A092 发酵液单体化合物的分离纯化 36 4.5 Arthrinium sp.A092 菌丝体单体化合物的分离纯化 38 4.6 结果40 4.6.1 Arthrinium sp.A092 发酵液化合物的波谱数据与结构鉴定 40 4.6.2 Arthrinium sp.A092 菌丝体化合物的波谱数据与结构鉴定 48 第五章部分化合物的活性研究55 5.1 材料55 5.2 主要实验试剂55 5.3 仪器55 5.4 方法55 5.4.1 抗肿瘤活性测定55 5.4.2 抗菌活性测定56 5.4.3 抗植物病原真菌活性测定56 5.5 结果与分析56 5.5.1 抗肿瘤活性结果56 5.5.2 抗菌活性结果57 5.5.3 抗植物病原真菌活性结果58 第六章小结59 参考文献60 攻读学位期间发表的论文69 附录70 致谢81 V VII 摘要紫玉盘（Uvaria microcarpa）系番荔枝科（Annonaceae）植物，主要分布于我国广西、广东和台湾，越南和老挝也有分布。有多种紫玉盘属植物可药用，治风湿、跌打损伤、止痛消肿等。紫玉盘属植物主要含番荔枝内酯类、多氧取代环己烯类、黄酮类等成分。Jolad[1]等采用活性测试追踪方法对紫玉盘属植物 Uvaria accuminata 根的乙醇提取物分离纯化得到内酯类化合物 Uvaricin，该化合物具有很强的抗癌活性。并且番荔枝内酯类化合物对大多数肿瘤细胞具有细胞毒活性，作为肿瘤药物候选分子具有广阔的研究前景，对该属植物的研究在不断的深入。植物内生真菌（endophytic fungi）指在其生活史的一定阶段或全部阶段生活在植物组织内不对植物组织引起明显病害症状的真菌。据报道，在“内生真菌-植物”这个稳定的共生系统中，内生真菌能够产生具有抗肿瘤、抗菌、抗氧化等多种生物活性的结构复杂的次级代谢产物，已成为新型药物开发的物质来源。本论文对采自鼎湖山和罗浮山自然保护区的药用植物紫玉盘的内生真菌进行了分离纯化，获得 13 株内生真菌，并对分离得到的内生真菌进行抗肿瘤、抗氧化和酪氨酸酶抑制活性筛选，获得一株代谢产物丰富、高活性内生真菌节菱孢 A092，经鉴定为 Arthrinium sp.，且查阅文献表明，不同环境来源的节菱孢可能由于其对环境的适应，代谢方式发生改变，产生的次级代谢产物也随之改变，结构多样，且大多