肿瘤相关巨噬细胞诱导乳腺癌耐药的作用及其机制分析-the role of tumor-associated macrophages in inducing drug resistance in breast cancer and its mechanism analysis.docxVIP

I I 肿瘤相关巨噬细胞诱导乳腺癌耐药的作用及其机制研究 中文摘要 肿瘤相关巨噬细胞诱导乳腺癌耐药的作用 及其机制研究 中文摘要 目的：探讨肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages，TAM)在乳腺肿瘤 细胞耐药中的作用及其分子机制。 方法：1、PMA、IL-4、IL-13 刺激人单核细胞白血病细胞系 THP-1，运用流式细 胞术检测细胞表面分子 CD14、CD204、CD206 的表达改变，建立 TAM 细胞模型；2、 采用 MTT 法和 Hoechst 染色法观察 TAM 细胞与乳腺肿瘤细胞 T47D、BT-549 直接接 触共培养、TAM 培养上清与肿瘤细胞共孵育体系中，TAM 细胞对乳腺癌细胞系药物 耐受性的影响，进而运用 Western Blot 检测 TAM 细胞对肿瘤细胞的 STAT3、JNK 磷 酸化水平的影响，再用 Real-Time PCR 方法检测 TAM 细胞对肿瘤细胞 bcl-2 基因表达 的影响；3、通过 ELISA 法检测 TAM 上清中 IL-10 含量的改变，并采用 Real-Time PCR 方法分析 IL-10 对肿瘤细胞抗凋亡基因 bcl-2 的调控作用，运用 Western Blot 检测 TAM 细胞对肿瘤细胞的 STAT3 信号通路的调控情况。 结果：1、经 PMA、IL-4、IL-13 刺激后 THP-1 细胞表面 CD14、CD204、CD206 的表达水平增加，提示成功建立 TAM 细胞模型。2、TAM 细胞或 TAM 培养上清与 肿瘤细胞共培养均可显著削弱紫杉醇对肿瘤细胞的杀伤，明显下调其 bcl-2 基因表达 水平以及凋亡信号 JNK 的磷酸化水平(p 0.05)，同时显著上调 STAT3 的磷酸化水平 (p 0.05)。3、TAM 细胞表达高水平 IL-10，细胞毒性分析显示 IL-10 可显著提高肿瘤 细胞耐药能力，同时上调肿瘤细胞抗凋亡基因 bcl-2、抗凋亡蛋白 p-STAT3 的表达； 若封闭 TAM 培养上清中的 IL-10，肿瘤细胞的药物敏感性显著提高，且 bcl-2 表达水 平下降，提示 IL-10/bcl-2 信号通路的激活可能是 TAM 细胞诱导耐药的机制之一。 结论：本研究发现了 TAM 细胞在诱导乳腺癌耐药中的重要作用，探讨了 IL-10 介导的 bcl-2 信号通路在 TAM 细胞诱导乳腺癌耐药作用中的关键作用，初步揭示了 TAM 细胞诱导耐药的分子机制，为抗肿瘤治疗提供了实验基础。 II II 中文摘要 肿瘤相关巨噬细胞诱导乳腺癌耐药的作用及其机制研究 关键词：肿瘤相关巨噬细胞；乳腺癌；耐药；白细胞介素-10 作 者：何林燕 指导教师：高 锋 PAGE PAGE IV 肿瘤相关巨噬细胞诱导乳腺癌耐药的作用及其机制研究 英文摘要 The Effect of Tumor-associated Macrophages on Chemotherapeutic Resistance of Human Breast Cancer and the Mechanism involved Abstract Objective：In order to observe the effect of tumor-associated macrophages (TAM) on drug resistance and further to explore the role of TAM in therapeutic resistance to paclitaxel. Methods：THP-1 human monocytic line cells were stimulated by PMA and further treated with Th2 cytokines(IL-4/IL-13). Flow cytometry was used to test CD14 (marker for monocyte differentiation), CD204 and CD206 (marker for M2 macrophages). The effective concentration and time of paclitaxel for inhibiting the proliferation of breast tumor cells, and inhibitory rate of breast cancer cultured alone and cocultured were detected by MTT. ELISA was used to detect the IL-10 concentration of TAM super