沉默mtdh基因对胃癌细胞sgc-7901趋化迁移的影响-effect of silencing mtdh gene on chemotactic migration of gastric cancer cell sgc - 7901.docxVIP

摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘 要 目的：胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，当前主要治疗是外科手术联 合放化疗，但是疗效仍不理想，患者 5 年生存率很低。肿瘤的侵袭和转移是其 术后易复发、预后差的最主要原因，而肿瘤细胞向微血管内皮趋化迁移是肿瘤 发生侵袭、转移的基础事件。本研究拟研究 MTDH 与胃癌转移的相关性及 MTDH/AEG-1 对胃癌细胞 SGC-7901 趋化迁移的影响。 方法：采用免疫组化 SP 法检测 MTDH/AEG-1 基因在 30 例胃癌组织及其癌 旁组织和 10 例对照正常组织中的表达；构建针对 MTDH/AEG-1 的干扰载体， 转染胃癌细胞株 SGC-7901，获得稳定细胞株；采用倒置荧光显微镜观察转染效 率；western blotting 检测干扰效率；趋化实验（Transwell）检测沉默 MTDH/AEG-1 表达的胃癌细胞株 SGC-7901 向人脐血内皮细胞的趋化情况；迁移实验 （Transwell）检测沉默 MTDH/AEG-1 表达的胃癌细胞株 SGC-7901 的迁移情况。 结果： 1. 免疫组化结果显示：①MTDH 蛋白在胃癌组织的表达情况：胃癌组织的 MTDH 蛋白表达量(86.7%)明显高于癌旁组织（36.7%）及对照正常组织（10%, 均 p0.01)，且胃癌组织的 MTDH 以强阳性表达为主，而癌旁组织及对照正常组织 均以弱阳性表达，且后者 MTDH 阳性表达几乎均在肠化腺体胞质及腔缘。○2 MTDH 蛋白表达与胃癌临床病理特征相关情况：III~ IV 期胃癌 MTDH 蛋白表达 量（84.2%）明显高于 I~II 期胃癌(27.3%，p0.01)；淋巴结转移组 MTDH 蛋白 表达量（75.0%）高于淋巴结未转移组(40.0%，p0.05)；远处转移组 MTDH 蛋 白表达量（90.0%）明显高于无远处转移组(33.3%，p0.01)；而与组织学分类、 分化程度、年龄、性别以及肿物大小无关（p0.05）。 2. 荧光倒置显微镜镜下观结果显示：3 个重组载体 pGPU6/shMTDH-1,2,3 和一个阴性对照组 pGPU6/shMTDH-NC 由脂质体介导成功转染胃癌 SGC7901 细 胞，转染效率达 70%左右。 3. Western blot 检测结果显示，以 β-actin 为内参照，转染 pGPU6/shMTDH-3 质粒的 shMTDH-3 干扰效率最高，干扰效率高达 70%(p 0.05)。 4. Transwell 趋化实验结果显示：正常组、阴性对照组和转染 pGPU6/shMTDH-3 质粒的 MTDH 沉默组向人脐内皮细胞定向趋化的细胞数分别 II 为 55±6.7、50±5.6、20±4.5，差异具有显著统计学意义（p 0.05），阴性对照 组与正常组比较无统计学差异（p 0.05）。 5.Transwell 迁移实验结果显示：正常组、阴性对照组和转染 pGPU6/shMTDH-3 质粒的 MTDH 沉默组向人脐内皮细胞定向迁移的细胞数分别 为 78±8.9、70±7.5、30±6.7，差异具有显著统计学意义（p 0.05），阴性对照 组与正常组比较无统计学差异（p0.05）。 结论：MTDH/AEG-1 与胃癌的发生发展和侵袭转移相关；沉默 MTDH/AEG-1 基因蛋白表达可抑制胃癌细胞 SGC-7901 的趋化和迁移能力，MTDH/AEG-1 基 因可能参与了胃癌转移的调控。 关键词：MTDH/AEG-1；SGC-7901 细胞；shRNA 干扰技术；趋化；迁移。 III Abstract Abstract ABSTRACT Objection: Gastric cancer is one of the common malignant tumors of the digestive system. Surgery combined with radiotherapy and chemotherapy is the major therapy at present. However, the treatment effect is not idea, for patients just having a low 5-year survival rate. Tumor invasion and metastasis is the main reason of post operative recurrence and poor prognosis in gastric cancer, and the tumor cells chemotaxis and migrate to vascular endothelial cell