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花叶良姜丛生芽诱导及增殖培养技术 　　摘要：试验研究了花叶良姜丛生芽诱导及增殖培养技术，结果表明：花叶良姜（Alpinia zerumbet cv.Variegata）组培最佳配方为MS+6-BA5.0 mg/L+NAA2.0 mg/L+椰子水60ml/L，芽继代培养30 d，增殖系数达7.5，增殖芽健壮，发育形成的叶片有光泽，黄绿斑纹明显。 　　关键词：花叶良姜；丛生芽诱导；增殖培养 　　中图分类号：S682.19 　　文献标识码：A 文章编号2017 　　1 引言 　　花叶良姜（Alpinia zerumbet cv.Variegata）是姜科山姜属多年生草本植物，原产于东亚，中国福建等省也有栽培[1]。花叶良姜叶片有金黄色富有光泽的纵斑纹，花姿优美，观赏价值高，是室内观赏、城市园林绿化、道路隔离带及两旁绿化的优良植物。目前，花叶良姜种苗主要采用分蘖繁殖，因为在有性生殖过程所造成的分离使90%以上的实生苗叶片变为绿色，失去黄绿嵌合的条纹[2]，而分蘖繁殖一般在4～10月进行，具有季节性，易导致苗木生产滞后。近10年苗木市场紧俏，遇上喜庆节日，种苗供不应求。为了解决市场供需矛盾，采用组培育苗方法是快速培育花叶良姜苗木的捷径。20世纪90年代学者开始研究花叶良姜组培技术，芽增殖系数最高为4[3]，为进一步提高增殖系数，本文针对花叶良姜丛生芽诱导及芽增殖培养技术进行研究。 　　2 材料与方法 　　2.1 材料 　　试验材料来源于广东花卉市场。选用斑纹艳丽，无病虫害、生长健壮的花叶良姜袋苗作为研究对象，以其根茎为外植体，通过灭菌消毒获取无菌活体为试验材料。试验时间2015年4月～2017年3月。 　　2.2 方法 　　2.2.1 基本培养基筛选 　　采用单因素区组设计方法，设计3种基本培养基：① MS、② N6、③ER。每种基本培养基内添加6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L。将形态特征基本一致的无菌根茎接种于培养基中，每种培养基接种20瓶，每瓶接种无菌根茎1块，3次重复。培养40 d观察记录根茎萌芽与芽生长状况。 　　2.2.2 丛生芽诱导最佳细胞分裂素种类与浓度的筛选 　　采用完全随机区组设计方法，试验设计6个处理，① KT：0.5 mg/L；②KT ：1.0 mg/L；③ 6-BA：2.5 mg/L；④6-BA：5.0 mg/L；⑤ ZT：0.5 mg/L；⑥ZT：1.0 mg/L，每处理添加MS+NAA 0.1 mg/L。每处理接种20瓶，每瓶接单芽1个，3次重复。培养 30 d，记录丛生芽形成的数量，计算丛生芽诱导率。 　　2.2.3 芽增殖培养 　　本试验采用L9（34）方法，详见表1。试验共9个处理，每个处理接种20瓶，每瓶接单芽1个，3次重复，培养30 d统计新芽增殖数量，计算各处理芽增殖系数。 　　2.2.4 椰子水最佳浓度的筛选 　　椰子水浓度试验设计3个处理：①30 mL/L；②60 mL/L；③120 mL/L，分别加入MS+6-BA5.0 mg/L+NAA2.0 mg/L培养基内。每处理接种20瓶，每瓶接芽1个，3次重复。培养30d，记录新芽数量和生长状况，计算芽增殖系数。 　　2.3 培养条件 　　所有的培养基均附加白糖30g/L，琼脂5 g/L，pH 6.0。培养基在1.1MP，120℃高温高压条件下灭菌消毒20 min。培养室温度（25±3）℃，光照时间每天12～14 h，光照强度800～3 000 lx。新转接的培养物，在800 lx光照条件下培养7～10 d（图1～图4）。 　　2.4 数据分析方法 　　试验数据采用Excel 2007、SPSS11.5进行数据统计及显著性分析。根茎萌芽率=萌芽的根茎数量/接种根茎总数×100%；丛生芽诱导率=形成丛生芽的单芽数量/接种单芽数量×100%；芽增殖系数=新增芽的数量/总接种芽数量。 　　3 结果与分析 　　3.1 基本培养基对根茎萌芽和芽生长的影响 　　表2可知，根茎萌芽率MS和N6与ER之间存在极显著差异。丛芽生长最适合的基本培养基为MS，它培养的芽粗壮，色带明显，叶面有光泽。MS不仅含有较高的无机盐，微量元素种类齐全，有机营养也丰富。N6和ER不含肌醇。肌醇在糖类的相互转化中起作用，参与碳水化合物，磷脂代谢及离子平衡等生理活动，对植物组织和细胞的繁殖、分化、芽的形成均有良好的促进作用。由此可见，肌醇对花叶良姜芽健康生长的促进可能起着有效的作用。 　　3.2 细胞分裂素对丛生芽诱导和生长的影响 　　表3可知，丛生芽诱导率处理2高达91.7%，处理4和6均为86.67%，三者不存在显著性差异。它们与处理5、1和3之间存在极显著差异；适宜丛生芽诱