珠子参皂苷联合5-fu对人宫颈癌caski细胞的作用分析-analysis of the effect of beasenoside combined with 5 - fu on caski cells of human cervical cancer.docxVIP

三峡大学硕士学位论文 三 峡 大 学 硕 士 学 位 论 文 内 容 摘 要 目的：探讨珠子参皂苷(PJ)单独及其与 5-氟尿嘧啶（5-FU）联合应用对人宫颈癌 caski 细胞诱导其凋亡的作用，为临床上联合应用珠子参皂苷和 5-FU 治疗宫颈癌提供 实验依据。 方法：(1) 取珠子参生药材，以醇提法制备珠子参皂苷粉末。(2) 体外培养人颈 鳞癌Caski细胞系细胞，用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度的5-FU、珠子参以 及合用在作用24、48及72h对caski细胞增殖的影响以及倒置相差显微镜观察细胞形态 的变化。(3) 选择适宜浓度的PJ 、5-FU及PJ与5-FU的合用组作用于Caski细胞，电镜 下观察caski细胞形态的变化。(4) qPCR检测不同药物处理后抑癌基因p53，p21与癌基 因c-myc,c-fos的表达情况。(5) Western blot检测PJ 、5-FU及PJ与5-FU的合用处理后 p53，p21蛋白及c-myc,c-fos蛋白的表达情况。 结果：(1) MTT比色法显示：PJ能抑制caski细胞的增殖，PJ和5-FU合用能增强单 药对caski细胞的增殖抑制作用。(2) 通过透射电子显微镜观察发现：PJ 可明显抑制 宫颈癌 caski 细胞的生长，细胞出现细胞膜微绒毛减少或消失，细胞活跃度明显下降， 细胞内出现凋亡小体，PJ与5-FU合用组抑制caski细胞生长作用最明显，凋亡细胞增多， 出现凋亡晚期的蟹爪状细胞，整体凋亡细胞比例增加。(3) qPCR法结果显示：PJ可上 调抑癌基因p53，p21的表达，下调癌基因c-myc,c-fos的表达；与5-FU组相比，PJ和5-FU 合用组在上调抑癌基因p53，p21的表达，下调癌基因c-myc,c-fos表达的作用更加明显。 （4）Western blot结果表明：PJ可上调p53蛋白的表达，显著上调p21蛋白的表达，显 著下调c-myc,c-fos蛋白的表达；与5-FU组相比，PJ和5-FU合用组在上调p53，p21蛋白， 下调c-myc,c-fos蛋白表达上的作用更加明显。 结论：本实验所选用剂量的PJ对人宫颈癌caski细胞有明显抑制增殖的作用，进一 步证明了PJ在体外可抑制肿瘤细胞生长。PJ与5-FU合用能增强5-FU对caski细胞的增 殖抑制作用，PJ与5-FU合用可诱导人宫颈癌caski细胞的凋亡，表明PJ可增强5-FU对 人宫颈癌的抑制作用及诱导凋亡的作用。PJ与5-FU合用可能通过影响caski细胞DNA 合成，改变细胞周期时相分布、诱导凋亡发挥抑制细胞增殖作用，其分子机制可能与 上调p53,p21的表达，下调c-myc,c-fos的表达有关。本研究结果提示了PJ抑制肿瘤细胞 生长的作用及与化疗药物5-FU合用的增效作用。可在此基础上进一步探讨PJ及PJ与 5-FU合用上调p53、p21，下调c-myc、c-fos的mRNA及蛋白表达相关的调控途径和机 制。 关键词：珠子参 5-FU 宫颈癌 细胞凋亡 II Abstract Objective To study the antitumor and induced apoptosis effects of Panax japonicus in combination with 5-Fu on Suppression on Human Cervical Carcinoma Caski Cells,this result will offer certain experiment basis for Panax japonicus in combination with 5-Fu in clinical practice. Methods (1) Alcohol extracting technology of Panacis Majoris Total Saponin powder from Panacis Majoris crude drugs .(2) Cervical carcinoma cells caski were cultured in vitro,caski cells were cultivated in medium supplemented with different concentration of 5-fluorouracil、Panax japonicus and 5-fluorouracil Combined Panax japonicus,MTT assay was applied to determine the effects of 5-fluorouracil、Panax japonicus