新生儿人巨细胞病毒感染实验室诊断研究进展.docVIP

新生儿人巨细胞病毒感染实验室诊断研究进展 　　[摘要] 新生儿巨细胞病毒性疾病是一种新生儿常见疾病，因其发病隐匿，故临床上以实验室检测为诊断疾病的关键。本文综述了实验室常用的检测方法，比较了各种检测方法的利弊及临床的应用状况和前景，为医生合理地诊断新生儿巨细胞病毒性疾病提供参考。 　　[关键词] 巨细胞病毒感染；新生儿；pp65抗原血症；研究进展 　　[中图分类号] R446 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2012）10（b）-0017-02 　　新生儿巨细胞病毒性疾病是由人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）感染所引起的一种疾病，新生儿因免疫系统尚未发育完全，机体抵抗HCMV的入侵能力极弱，很容易形成HCMV活动性感染。2004年的统计学研究报道，新生儿的HCMV平均感染率接近10%，病死率接近20%；其余感染患儿可出现中枢神经系统损害、颅骨发育畸形、发育迟缓等症状[1-3]。因HCMV感染无特异的临床症状和体征，而且患儿多因免疫系统发育不完全而表现为隐性感染，故如何准确、快速、特异性地检测到早期HCMV活动性感染成为临床治疗的关键。 　　1 病毒分离 　　病毒分离法一直被认为是诊断HCMV活动性感可靠性和特异性最强的方法。利用免疫标技术检测病毒抗原可缩短病毒检测时间至24～48 h。常采用尿样本，也可取体液和组织样本[4-5]。该方法将尿、脐血等检测标本与人胚成纤维（HF）细胞共同孵育，在培养1～3周后，观察HF细胞有无出现致细胞病变效应。但由于HCMV在体外生长速度缓慢，检测时间长，不能快速确诊以满足临床需要，故该法主要应用于科研[3]。 　　2 血清特异性抗体检测 　　新生儿HCMV感染后可刺激人体产生体液免疫反应，因此，通过ELISA法检测血清中特异性HCMV-IgM、HCMV-IgG抗体可间接证实体内是否有HCMV感染。其中，血清IgM抗体因发生于感染早期，故IgM抗体阳性被认为是HCMV活动性感染的指标；而血清IgG抗体阳性则表明患儿曾有HCMV感染史[6]，若HCMV-IgG滴度升高4倍以上则提示有HCMV活动性感染。 　　2.1 特异性IgM抗体检测 　　抗HCMV-IgM是原发感染或活动性感染标志。HCMV-IgM抗体可于感染后3～5 d首次出现，如持续3～6个月，则提示近期活动性感染。虽然血清HCMV-IgM抗体检测常被用作诊断感染性疾病的原发感染，但是该法特异性高，敏感性差。有学者报道[7]ELISA法检测血清HCMV-IgM敏感性和特异性分别为19%和100%。而且HCMV感染的患儿多缺乏免疫力，HCMV-IgM抗体多于1周后或者数周才能检出，HCMV-IgM抗体延迟出现容易延误病情，因此限制了其对HCMV活动性感染的早期诊断的应用。同时，IgM 抗体与其他病毒感染有交叉反应，很容易出现假阳性的结果，造成误诊[8]。 　　有学者[9]采用金标免疫层析法检测，提高了HCMV-IgM抗体检测的特异性和敏感性，弥补了因敏感性过低造成的假阴性的检出率，但金标免疫层析法检测成本较高，很难得到广泛的推广。 　　2.2 特异性IgG抗体检测 　　IgG特异性抗体在HCMV感染1～2周后出现，4周后检出，因其具有“记忆性”，故在机体内可持续存在数年甚至终生。目前，通过对IgG 的亲和力的检测可以区分近期是否存在近期的活动性感染。有研究表明，HCMV-IgG亲和力30%可以作为非活动性感染与活动性感染的的诊断界限。如联合IgM则检出阳性的敏感度明显增加。 　　3 HCMV抗原检测 　　患儿机体感染巨细胞病毒后可在早期外周血白细胞中检测到巨细胞病毒抗原，而且抗原血症出现明显早于症状的改变。因此，pp65抗原血症检测法已成为常见的且具有前期诊断意义的HCMV活动性感染的检测指标。通过对单克隆抗体反应识别pp65抗原，应用免疫酶化学染色或免疫荧光鉴别含有该抗原的白细胞，并对阳性细胞进行计数判断是否患儿处于HCMV活动性感染期。研究表明[10]，HCMV抗原阳性细胞数目与HCMV疾病的严重程度具有良好的相关性，即症状性感染时抗原血症水平高，无症状感染时抗原血症水平低，感染初期及恢复期水平低，发生进展性HCMV疾病时水平则迅速上升。但该法的缺点在于，如果使用抗病毒药物治疗，则pp65抗原阳性率及其含量会明显降低。 　　最近pp67-mRNA检测显示出一定的优越性。pp67-mRNA是由HCMV UL-65基因转录编码的一种基质表层蛋白，而该基因仅在活动性感染时表达。pp67属于晚期的结构基因，其转录表达预示着病毒复制已完成。Gerna等于1999年首先报道对26例患者采用核酸序列依赖扩增法检测pp67-mRNA，同时与pp65抗原检测和白细胞定量PCR检测作比较，结果显示