中药指纹研究探究 技术.ppt

内 容 一、中药指纹图谱技术概述 2. 国内中药质量评价现状 植物学方法： 原植物鉴定，显微鉴定等 植物化学方法： 理化鉴定 分析化学方法： 仪器分析，色谱分析等 药理学方法： 生物鉴定法，生物等效等 分子生物学方法: DNA指纹鉴定 图9 上海制首乌指纹图谱 北京良方药业制首乌 北京金象药店制首乌 北京寿春堂药店制首乌指纹图谱 （6） 流动相（梯度表）的选择 主要影响因素 1. 起始浓度 2. 梯度速率 3. 流速 时间∕min 水%（H+/OH-）* 乙腈%* Ⅰ ? 0 100 0 55 20 80 60 0 100 Ⅱ ? 0 100 0 40 70 30 60 60 40 Ⅲ ? 0 80 20 40 60 40 60 50 50 Ⅳ ? 0 60 40 40 30 70 60 0 100 * 为体积百分比（V/V） 指纹图谱流动相梯度优化 * 为体积百分比（V/V） 梯 度 表 初始色谱条件 时间（min） 水%（H+/OH-） 乙腈% 0 100 0 60 0 100 时间（min） 水%（H+/OH-） 乙腈% 0 100 0 55 20 80 60 0 100 初始色谱条件的设定依据及目的 依据：化合物极性大小。如未知时，假设有效组分中包含各种极性的成分。 目的：快速确定主要或大部分化合物被洗脱时流动相的组成，为优化条件的选择提供依据。 优化条件的选择 选择依据：初始色谱图、梯度洗脱表及一定的经验 示 例：（1）淫羊藿总黄酮（40%）提取物 （2）钩藤总生物碱 （3）黄连药材 （4）知母总皂苷 淫羊藿提取物在初始条件下的色谱图 2. 数 据 获 取 途 径 （1）图形/图像转化成ASCII数据 （2）截片数据 （3）色谱数据 3. 相 似 度 算 法 夹角余弦算法 相关系数算法 优 化 算 法 1. 软件开发原则 2. 市售/常用软件简介 3. 相似度软件使用过程中应注意的问题 （三）、指纹图谱相似度评价软件 1. 软 件 开 发 原 则 系统独立性 (2) 计算方法的科学性 (3) 数据接口通用性 (4) 操作过程及应用的实用性 2. 市售/常用软件简介 浙江大学 陈一宇教授 中南大学 梁逸增教授 沈阳药科大学 毕开顺教授 西北大学 李华教授 二军大 Waters 3. 相似度软件使用过程中应注意的问题 数据接口与数据类型 数据的校正 算法的选择 四、中药指纹图谱的研究方法与思路 （一）、研究方案设计 （二）、样品的选择与收集 （三）、供试品的制备 （四）、指纹图谱色谱条件研究的思路 （五）、相似度值的研究与指纹特征 （一）、研究方案设计 资料收集与整理 文献、工艺资料、质量标准 方案的设计 （1）研究对象-有效成分 （2）研究方法的选择-色谱法(HPLC GC TLC)及其它方法 （3）研究内容-根据技术要求的规定：包括“名称、来源、制备、检测方法、标准规定及起草说明” （二）、样品的选择与收集 要求： 10个批次 道地药材与GAP基地药材 典型性与代表性 离散样品的剔除 （三）、供试品的制备 依据： 有效组分的物理化学性质 生产或提取工艺 检测方法的需要 （四）、指纹图谱色谱条件研究的思路 高效液相色谱法 HPLC 气相色谱法 GC （1） 检测波长的选择 （简） （2） 柱温的选择 （略） （3） 进样量 （简） （4） 色谱柱的选择 （重点） （5） 检测成分的选择 （重点） （6） 流动相（梯度表）的选择 （重点） 1. 高 效 液 相 色 谱 法 HPLC 示例：蜂胶(Bee Propolis) （1） 检测波长的选择 ?=280nm ?=360nm ?=254nm ?=210nm 波长选择：?=280nm （4） 色谱柱的选择 选用市场上较常见的填料所填充的色谱柱，例如：Eka-Nobel的Kromasi C18 (5