木薯粉乙醇清液发酵中糖化条件研究.doc

木薯粉乙醇清液发酵中糖化条件研究 　　摘要：在木薯粉液化工艺确定的条件下，研究木薯粉糖化性能，用糖化后的滤清液发酵乙醇。先将木薯粉完全液化，经降温、调pH值后，以水为提取液，考察糖化时间、糖化酶用量、液料比等单因素对糖化工艺的影响，并着重分析了液料比对发酵乙醇浓度的影响；由于糖含量过高会影响乙醇发酵的结果，以最终乙醇浓度为考察目标，在单因素的基础上应用响应面法对糖化工艺进行了优化。试验所得较佳条件为：液料比2.5 mL ∶1 g，糖化酶用量为200 U/g（木薯粉），糖化时间105 min；并按此条件进行了验证试验，所得结果与响应面试验结果一致，表明该模型可用于木薯糖化试验的设计与预测。 　　关键词：木薯；发酵；乙醇；糖化 　　中图分类号：TQ920.6 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2015）07-0272-04 　　目前，在石油资源紧缺、原油价格不断攀升、环境压力日益加重的情况下，燃料乙醇作为一种清洁的可再生能源应运而生[1-3]。燃料乙醇作为车用液体燃料，在交通运输方面有着太阳能、风能、水能等其他可再生能源不可替代的作用。木薯淀粉含量极高，且是非粮作物，利用木薯为原料有利于保障国家能源安全和粮食安全，比利用玉米、小麦、甘蔗等原料更经济，社会效益也较为突出[4-9]。 　　利用木薯粉进行乙醇发酵时，发酵液的黏度过大会对多罐连续发酵中物料的流动造成极大影响，也给醪液的搅拌、加热、冷却带来很大困难。木薯在收集时也易混入砂石、金属等杂物，容易引起机械设备运转部位的磨损，使换热器堵塞，机器发生故障，降低使用寿命。砂石进入生产线后，会在发酵罐、蒸馏塔中沉积，造成管道设备堵塞，清洗困难，引起染菌、升酸等问题[10]，同时也增加了物耗、能耗，造成生产不稳定。为了解决这些问题，应尽可能地减少糖损失，本研究采用清液发酵的方式除砂并降低醪液黏度，主要对清液发酵的糖化条件进行了研究。 　　1 材料与方法 　　1.1 原料与试剂 　　木薯粉，河南天冠企业集团有限公司；液化酶：耐高温α-淀粉酶，酶活力为76 999 U/mL，河南天冠企业集团有限公司；糖化酶：酶活力为73 800 U/mL，河南天冠企业集团有限公司；菌种：耐高温活性干酵母（TH-AADY），湖北安琪生物集团有限公司；硫酸、氢氧化钠、碘、碘化钾、3，5-二硝基水杨酸等化学试剂均为分析纯。 　　1.2 试验仪器 　　紫外可见分光光度计（UV-2012PC），龙尼柯仪器有限公司；酒度计，河北省武强县同辉仪表厂；旋转式黏度计（NDJ-79），同济大学机电厂；精密酸度计（PHS-3C），上海大普仪器有限公司；电子天平（AL204），梅特勒-托利多仪器有限公司；智能水浴锅（HH-S6），郑州长城科工贸有限公司；循环水多用真空泵（SHZ-D），上海予英仪器有限公司。 　　1.3 测定方法 　　还原糖的测定：3，5-二硝基水杨酸（DNS）比色法[11-12]，建立标准曲线为：y=3.949 7x+0.073 7（r2=0.999 4），其中x为吸光度，y为葡萄糖浓度（mg/mL）。 　　乙醇的测定：酒度计法[13]。 　　黏度测定：用NDJ-79型旋转式黏度计。 　　1.4 木薯原料分析 　　木薯中的水分含量采用105 ℃恒质量法测定；木薯中淀粉含量根据文献[13]中的方法测定。 　　1.5 液化醪液的制备 　　经前期单因素试验确定液化条件为：以液料比 2.5 mL ∶1 g 进行润料，按1 g木薯粉加入20 U的量添加液化酶，60 ℃预热10 min后在95 ℃液化，1 h后碘检；液化完成后，将液化醪液降温到60 ℃，调节pH值至4.5，供糖化试验用。 　　1.6 木薯糖化条件的单因素试验研究 　　预先将液化酶与拌料水混合，然后加入木薯粉调浆，再置于水浴锅中，升温液化；碘检显示液化结束后，搅拌降温至糖化温度，调节pH值，加入糖化酶后保温一段时间；糖化结束后抽滤，取清液加入活化酵母进行乙醇发酵，待发酵完成后检测乙醇浓度。 　　1.6.1 糖化时间对糖化的影响 在液化后的醪液中按1 g木薯粉添加150 U的量加入糖化酶，置于60 ℃恒温水浴锅中，考察不同糖化时间对糖化的影响。 　　1.6.2 糖化酶用量对糖化的影响 在液化醪液中分别加入不同量的糖化酶，其他操作条件不变，考察糖化酶量对糖化的影响。 　　1.6.3 液料比对糖化的影响 以不同液料比进行润料，其他操作条件不变，考察不同液料比对糖化的影响。 　　1.6.4 液料比对发酵的影响 以不同液料比润料，考察不同液料比对发酵（主要指乙醇浓度）的影响。 　　1.7 木薯糖化工艺优化 　　根据单因素试验结果，以不同的液料比润料，加入液化酶量为20 U/g（木薯粉），60 ℃预热10