木质纤维素分解复合菌系分解特性与细菌组成多样性分析.docVIP

木质纤维素分解复合菌系分解特性与细菌组成多样性分析 　　摘要：利用木质纤维素分解复合菌系BYND-8对稻秆进行生物处理，研究其分解特性及其?菌组成多样性，为应用微生物方法处理木质纤维素类资源提供理论依据。通过测定复合菌系在分解稻秆的过程中木质纤维素各成分含量的变化，同时测定分解过程中培养基pH值的变化趋势，研究其分解特性。运用高通量测序技术对复合菌系rRNA基因的V3-V4区进行测序，分析其细菌组成多样性。结果表明，复合菌系BYND-8具有较高的木质纤维素分解能力，对培养基的pH值具有自我调节能力；在纲、目、科3个分类水平上，分别将复合菌系中的细菌分成了73个纲、132个目和226个科，复合菌系中细菌在科的分类水平上比较丰富，其中相对量较高、占优势的细菌为紫单胞菌科（Porphyromonadaceae，1873%）、柄杆菌科（Caulobacteraceae，1203%）和理研菌科（Rikenellaceae，1196%）。木质纤维素分解复合菌系BYND-8具有较高的细菌组成多样性。 　　关键词：木质纤维素；分解；复合菌系；高通量测序；多样性分析；木质纤维素分解机理 　　中图分类号： Q9399；S182文献标志码： 　　文章编号：1002-1302（2017）16-0241-06 　　收稿日期：2016-09-20 　　基金项目：黑龙江省大学生创新创业训练计划（编号：20141022311）；国家科技支撑计划（编号：2015BAD21B04、2016YFD0800602）；黑龙江农垦总局科技攻关项目（编号：HNK125B-11-06A、HNK125B-11-11A、JCTG17-04）。 　　作者简介：何水清（1994―），男，江西宁都人，主要从事农业废弃物资源化利用与环境微生物分子生态学的研究。E-mail：616022790@qqcom。 　　通信作者：王伟东，博士，教授，主要从事农业废弃物资源化利用与环境微生物分子生态学的研究。E-mail：wwdcyy@126com。 　　为了减少化石燃料的过度开采而带来的环境污染，木质纤维素这一重要的生物质资源越来越受到重视。中国是一个农业大国，每年作物秸秆产量约8亿t，其中含有大量的木质纤维素资源。这些秸秆中约有30%没有得到资源化利用，大部分被就地焚烧，不仅造成了资源的浪费，而且引起了严重的环境污染。近年来，秸秆等木质纤维素类废弃物资源化利用越来越受到政府和科研工作者的重视，其中高效、环保、廉价的生物处理法被日益采用[3]。崔宗均等从堆肥样品中富集筛选、驯化得到1组可高效稳定分解木质纤维素的复合菌系MC1[4-5]；赵听等得到了能分解小麦秸秆的复合菌群FWD1，小麦秸秆的分解率达到7692%；刘长莉筛选驯化出复合菌系NSC-7，稻秆的分解率达447%。同样也有分解木质纤维素的单菌与复合菌系分解能力比较的研究报道，张晓伦等从垃圾堆腐物中分离得到了3株具有较强纤维素分解能力的真菌，发现由2种不同菌株组成的混合菌系比任何单一菌株的纤维素分解能力强，CMC酶活性是单一菌株的15倍[8]；陈耀宁等将1株黄孢原毛平革菌和1株歧皱青霉混合培养，发现木质纤维素的分解率较单一菌株大大提高[9]；温雪等将2株具有较强木质纤维素分解能力的菌株与2株无分解能力的菌株进行组合，发现组合菌群的纤维素分解能力较单独的菌株分解能力稳定而高效[10]。Kato 等通过对复合系MC1中关键菌株的重新组合发现其纤维素的分解能力高于单一菌株[11]。单一菌株对木质纤维素的分解能力远不及多种菌株协同作用[12-13]。因此，利用微生物复合菌系各菌株之间的协同作用来高效稳定地分解木质纤维素并分析其分解机理具有重要意义。 　　本研究以实验室构建的中温木质纤维素分解复合菌系BYND-8为研究对象，运用高通量测序技术分析其细菌组成多样性，为复合菌系分解木质纤维素的机理奠定基础。 　　1材料与方法 　　11培养条件 　　纤维素蛋白胨培养基（PCS）：蛋白胨50 g，NaCl 50 g，CaCO3 20 g，酵母粉10 g，木质纤维素（稻秆）50 g，蒸馏水1 L，pH自然，1×105 Pa灭菌15 min，按培养基体积的10%接种，30 ℃静止培养。 　　稻秆预处理方法：将稻秆剪切成5 cm的小段，用1%的NaOH溶液浸泡24 h，然后用自来水冲洗稻秆，再用盐酸（1 mol/L）浸泡，之后用自来水冲洗并浸泡12 h，至pH值为70左右，105 ℃烘干至恒重备用。 　　12复合菌系的筛选 　　把旺盛产沼气的培养液10 mL接种到装有90 mL PCS培养基的三角瓶内，提前放入滤纸条作为分解的外观指标，将05 g经预处理的稻秆作为碳源，30 ℃静止培养。当滤纸条完全分解、稻秆软化时，按体积10%的