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杂交榛子授粉亲和性荧光检测分析
杂交榛子授粉亲和性荧光检测分析
摘 要:以10个榛子主栽品种为试材,进行自花和异花授粉后花柱的荧光显微观察,筛选适宜授粉品种。结果表明:1~21的花粉活力和对其他品种授粉的亲和力最强,其花粉活力达到81%,对8个主栽品种表现为亲和,最适合做授粉品种。
关键词:榛子;花粉;杂交;亲和性;显微;观察
中图分类号:S664.4 文献标识码:B 文章编号:1002-2910(2010)06-0014-03
榛子是桦木科榛属(Cotylud)植物,主要分布于亚洲、欧洲和北美洲,为重要的经济树种,其果实是世界四大坚果之一。世界上榛子的栽培品种大多数是大果型欧榛(corylus avel-lana),我国的栽培品种多为平榛(corylus het―erophylla)和杂交榛。榛子为雌雄同株异花果树,雄花为茅荑花序,着生于新梢中上部叶腋处,雌花为混合芽,簇生,着生于雄花序下部。目前在配置榛子适宜授粉品种时,常是依据田间不同品种间授粉坐果率的高低来确定,这种方法直观有效,但工作量大、周期长,为了克服常规方法的不足,近年来胼胝质荧光反应技术已经广泛用于花粉和雌蕊相互作用的研究,Mehlenbacher等运用该方法对欧榛的自交和杂交亲和性进行了鉴定。笔者以5个榛子主栽品种为试材,利用荧光显微镜技术对白花及异花授粉处理后的花柱进行压片,观察授粉后花粉管生长状况,判定不同榛子品种的亲和性。以期为杂交榛子品种的授粉提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供粉品种(系)选用抗寒性较好的1―21、82―11、达维、玉坠和辽3,选用目前主栽品种82――、达维、玉坠、金铃、薄壳红、辽1、辽2、辽3和辽4作受粉母本,试材均取自辽宁省经济林研究所瓦房店市炮台实验基地。
1.2 试验方法
1.2.1 授粉方法及样品处理2010年春季开花前采集父本的健壮枝条,室内水培催花取花粉,参照Thompsont的方法,雄花开放时剪取-花序,用塑料袋密封,在不同的密闭室内收集花粉,置于棉塞试管,-20℃保存备用。每次收集花粉时分别用自来水和酒精擦洗双手。母本同样于开花前(但要晚于父本2天)采集健壮枝条,去雄,室内水培催花。待雌花开放时,连续3天上午9~11时在室内对水培的雌株授粉。用父本1~21和82~11花粉分别对9个母本授粉;用父本达维、玉坠和辽3的花粉分别对82―11、达维、玉坠和辽3母本授粉。授粉的植株置于不同的密闭房间内完全隔离,每个被授粉植株选用15―20个雌花,授粉后24小时采集花柱连同子房,用FAA固定液固定。每次每株随机取5朵花进行荧光显微检测。
1.2.2 花粉活力测定 参照胡适宜的琼脂法,花粉活力测定采用固体培养基离体培养法,用胶头滴管吸取液态培养基,在载玻片上滴制成厚度约3ram的半球形培养基。待培养基凝固后,用牙签粘取少量花粉均匀弹播于培养基上,20%下保湿,黑暗培养24小时后统计花粉萌发率和花粉管长度,以花粉管长度达花粉粒直径1/2以上为萌发标准。
1.2.3 荧光显微镜观察及亲和性判定参照王浩的方法。样品经FAA固定24小时后取出,用1moL/L氢氧化钠溶液室温浸泡软化2小时,用0.5%水溶性苯胺蓝溶液染色2小时。选取基本等长的已授粉花柱,用镊子将其从紧靠子房端取下,放在载玻片上,滴1滴苯胺蓝溶液或甘油,防止制备的玻片样品产生气泡,影响照片效果。用盖玻片压片,然后立即置于O-lympus荧光显微镜下观察。拍摄荧光显微照片,辐射滤光片使用UGl。
亲和性判定采用Thompson的方法,即根据花粉在柱头上的萌发情况和花粉管在花柱组织中的生长状况判断其亲和程度。授粉24小时后花粉管在花柱表面扭曲,生长停滞,伸入不到柱头里面为授粉不亲和,花粉管大量伸入到柱头里面并沿花柱道向下生长为授粉亲和,有花粉萌发但萌发量少的为部分亲和。
2 结果与分析
2.1 不同榛子品种的花粉活力和授粉亲和性
不同品种榛子的花粉活力差异较大,其中以1―21的花粉活力最高,为81%,其他4个品种的花粉活力较低,依次为82~11(49%)、辽3(29%)、玉坠(19%)和达维(11%),均未超过50%,不利于授粉。由表1可见,1~21花粉与9个母本品种表现为8个亲和1个部分亲和;82~11的杂交或自交组合只表现部分亲和-或不亲和。玉坠仅与达维表现亲和,与82~11、玉坠和辽3表现部分亲和或不亲和。由此可见,1~21的花粉活力最强,与各品种杂交表现亲和能力也最强,适合作授粉品种。
2.2 榛子授粉亲和程度在柱头一花柱上的表现
荧光显微镜下观察经FAA固定的材料时,花粉呈黄色,花粉管呈绿色。亲和授粉的柱头大量花粉粒已
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