《产毒副溶血性弧菌快速检验方法》编制说明.doc

出入境检验检疫行业标准草案编制说明 编写模版（格式） 出入境检验检疫行业标准草案编制说明的编写模版 1 基本信息 1.1 标准草案名称 中文 产毒副溶血性弧菌快速检验方法 英文 The rapid detection of toxicity Vibrio Parahaemolyticus 1.2 与国际标准和国外先进标准一致程度情况 等同 修改 非等效 标准号 英文名称 中文名称 1.3 任务来源 批准立项的文件名称和文件号 任办科涵【2010】167号 计划编号 2010B152 1.4 制（修）订情况 制订√ 修订 替代的标准编号 1.5 起止时间 2011年1月～2012年12月 1.6 起草单位 中华人民共和国云南出入境检验检疫局，中华人民共和国上海出入境检验检疫局，上海市临床检验中心，昆明市西山区疾病预防控制中心。 1.7 起草人 陈丽萍，刘忠民，张继伦，陈芸，彭云霞，王庆忠，王珏 1.8 专业类别 1√、食品（化妆品）检验；2、卫生检疫；3、动物检疫；4、植物检疫； 5、纺织产品检验；6、轻工产品检验；7、机电产品检验；8、化工、矿产品和金属材料检验；9、管理；10、鉴定；11包装及危险化学品 1.9 标准体系表代码 1.10 调整情况 完成时间延期至2013年12月 2 背景情况 2.1 目的、意义 副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种嗜盐性弧菌，主要存在于近海岸的海水、浮游生物、海底沉积物、鱼、虾、蟹、螺、贝类等鲜海产品或盐渍加工品中 。人可因食用被副溶血性弧菌污染而未煮熟的海产品而引起腹泻、肠痉挛、恶心、呕吐、发烧等胃肠炎反应。在夏秋季副溶血性弧菌是全球沿海地区人腹泻的主要病原菌，在我国此菌也较长期居于食物中毒已检出致病菌的前例。部分国家对食品中的副溶血性弧菌有严格限量。我国要求食品中不得检出副溶血性弧菌。 我们从食品微生物检测工作中发现，海产品中副溶血性弧菌的检出率很高，有时可达100%。但据文献报道，自然环境中分离的副溶血性弧菌有95%是非致病性的，仅有5%的是致病性的。海产品经冷冻或冷藏、烹调等加工处理后，副溶血性弧菌可能处于活的非可培养的状态，但致病性副溶血性弧菌携带的耐热溶血毒素（tdh）和相关溶血毒素（trh）依然存在。统计显示，人们食用海产品引发的腹泻率远低于海产品的携带率。为此，筛检出致病性副溶血性弧菌，比只检出副溶血性弧菌更有价值。另外，判定患者呕吐或腹泻是否由致病性副溶血性弧菌引起，也需要对患者的呕吐物或粪便物或肛拭进行致病性副溶血型弧菌的检测。目前，参照GB/T 4789.7-2008、ISO/TS 21872-1-2007、GB/T 26426-2010和SN/T 0173-2010标准对致病性副溶血性弧菌的检测步骤是：分离培养、生化鉴定、神奈川实验和血清学实验，整个过程检测工作量巨大，检测周期很长，工作繁琐，操作和判定也不容易，而且成本较高，当检测大量样品时难以应付。行标SN/T 2424-2010以及SN/T 2754.5-2011已采用分子生物学手段检测是否携带副溶血性弧菌，但不能检测是否携带致病性副溶血性弧菌。因此需要建立能够快速、准确、简便的检测致病性副溶血性弧菌的标准。 本研究应产毒副溶血性弧菌的检测标准建立的需要创立了两种检测方法。第一法是：同时扩增副溶血性弧菌种特异性的gyrase基因和tdh、trh致病基因的三重PCR方法；第二法是：同时扩增副溶血性弧菌 tlh基因和tdh致病基因双重TaqMan实时PCR方法，为副溶血性弧菌及产毒副溶血性弧菌的检测提供了便捷的分子检测技术。 2.2 与国内外相关标准、文献的关系 本标准使用的方法均为自主创新的方法，并经大量的特异性验证、结果对比、稳定性和重复性验证以及第三方验证确定下来。 运用本标准的第一法（三重PCR方法）和FDA 2004标准方法检测相同的13个样品时，对比发现两种检测结果一致，而且本标准的第一法和FDA 2004标准的扩增结果相比，本标准方法的扩增条带特别是trh条带更清晰，三条目标条带的电泳间距更大，更易判断。另外，本标准第一法提及使用新设备——全自动毛细管电泳分析系统，和FDA2004标准相比，检测速度将更快、人员操作将更安全。另外，本标准第二法提供了双重TaqMan实时PCR的方法，同样也是一个快速准确的检测方法，运用第二法对相同的13个样品进行检测，其检测结果和第一法的检测结果一致。目前，国内还没有运用多重PCR的方法鉴定产毒型副溶血性弧菌的标准。 3 编制过程 3.1 准备阶段（可选项） 本标准查阅了国内外相关检测方法和规程，食品合格判定标准、流行病学分布，致病性检测检验方法，对人群健康危害，已公认的致病基因等内容，在国家认监委资助下，同兄弟局上海出入境