柔毛鸦胆子茎化学成分及其肿瘤细胞毒活性研究.docVIP

柔毛鸦胆子茎化学成分及其肿瘤细胞毒活性研究 　　[摘要]运用各种柱色谱方法和制备型HPLC技术对柔毛鸦胆子茎的化学成分进行分离纯化，共从其茎的95%乙醇提取物中分离得到10个化合物，采用NMR等波谱技术鉴定其结构分别为deacetylated isobrucein B（1），indaquassin X（2）， cleomiscosin A（3），cleomiscosin B（4），（+）-lyoniresinol（5），（+）-表松脂醇（6），（+）-松脂醇（7），（+）-丁香脂素（8），4，5-dihydroblumenol A（9），腺苷（10）。采用MTT法对以上化合物进行了体外细胞毒活性测试，化合物2对人源肿瘤细胞HT-29，HepG2，BGC-823和SKOV3具有显著的细胞毒活性（IC50 0.84～3.97 μmol·L-1）。所有化合物均为首次从该植物中分离得到，其中化合物1是1个新天然产物。化合物2对人源肿瘤细胞HT-29，HepG2，BGC-823和SKOV3具有显著的细胞毒活性。 　　[关键词]苦木科；柔毛鸦胆子；化学成分；细胞毒活性 　　柔毛鸦胆子Brucea mollis系苦木科 Simaroubaceae鸦胆子属Brucea植物，又名大果鸦胆子、毛鸦胆子，产于我国广西、广东、云南及印度和马来西亚等地区，为灌木或小乔木。该属植物全世界有6种，我国只有鸦胆子B. javanica和柔毛鸦胆子2种，主要用于治疗痢疾、疟疾、赘瘤、鸡眼等[1-2]。化学成分研究表明该属植物的主要成分为苦木素类，此外还有少量的生物碱、萜类和苯丙素类等成分；药理活性广泛，具有细胞毒、抗疟、抗炎、抗病毒及降血脂等活性[3]。为了更好的开发利用鸦胆子属资源，对采自广西靖西柔毛鸦胆子的茎进行了系统的化学成分研究，在前期工作基础上[4-5]，又从中分离中分离得到10个化合物，分别鉴定为deacetylated isobrucein B（1），indaquassin X（2），cleomiscosin A（3），cleomiscosin B（4），（+）-lyoniresinol（5），（+）-表松脂醇（6），（+）-松脂醇（7），（+）-丁香脂素（8），4，5-dihydroblumenol A（9），腺苷（10）。以上化合物均为首次从该植物中分离得到，其中化合物1是新天然产物。化合物2对人源肿瘤细胞HT-29，HepG2，BGC-823和SKOV3具有显著的细胞毒活性。 　　1 材料 　　Inova 500 FT核磁共振仪，溶剂峰为内标；Agilent 1100 Series LC-MSD-Trap-SL型质谱仪测定ESI-MS；Perkin-Elmer 241旋光仪；LC-6AD岛津液相色谱仪，制备型反相YMC-Pack ODS-A色谱柱（20 mm×250 mm， 10 μm）；反相Rp-C18 （25～40 μm） 材料由日本Fuji Silysia公司生产；SephadexTM LH-20为瑞典Amersham Pharmacia Biotech AB生产；大孔树脂 Diaion HP-20为北京绿百草科技公司生产；柱色谱硅胶（160～200目）和薄层色谱硅胶GF254均为青岛海洋化工厂产品。 　　实验药材于2009年7月采于广西省靖西县，由广西中医学院韦松基教授鉴定为柔毛鸦胆子B. mollis的茎，标本存放于中国医学科学院药物研究所标本室（No.ID-21977）。 　　2 提取分离 　　干燥的柔毛鸦胆子茎（6.5 kg） 粉碎后用95%乙醇回流提取3次，每次2 h。提取液减压浓缩成浸膏后将其悬浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分别得60，82，102 g。乙酸乙酯萃取物经硅胶柱色谱以氯仿-甲醇（70∶1～1∶1） 梯度洗脱，得到6个组分（Fr.1～Fr.6）。Fr.1先经硅胶柱色谱以石油醚～乙酸乙酯（2∶1～1∶1）反复纯化，得3个流分Fr.1a～Fr.1c。Fr.1a经Sephadex LH-20柱色谱（甲醇洗脱）纯化，再经制备液相色谱（45%乙腈， 5 mL·min-1） 得化合物3（20 mg，tR 26 min），4（26 mg，tR 32 min）。Fr.1b经Sephadex LH-20柱色谱（甲醇洗脱）分离纯化，得化合物5（8 mg），6（6 mg）。Fr.1c经Sephadex LH-20柱色谱（甲醇洗脱）分离纯化，得化合物7（40 mg），8（3 mg），9（15 mg）。Fr.2先经中压制备液相色谱以甲醇～水（20%～90%）梯度洗脱，得5个流分Fr.2a～Fr.2e。Fr.2c经Sephadex LH-20柱色谱（甲醇洗脱）得到化合物1（36 mg）。正丁醇部位萃取物经