120301 医学分子生物学-1.pptVIP

研究生的学习 理论知识－基础 实践能力－平台 理论指导实践 实践拓展理论 科学研究的成功之路 Work（hard） Network Judgement luck 科学研究 系统性 连续性 完整性 . . . . . . 分子生物学(molecular biology) 从分子水平去研究生命现象，并在分子水平上改造和利用生物的一门新兴学科。 生物大分子(biomacromolecule)  核酸(nucleic acid ) 蛋白质(protein) 糖复合物 脂类 生物大分子(biomacromolecule)  核酸: 核苷酸（碱基，核糖，磷酸） DNA RNA (mRNA,tRNA,rRNA, siRNA ,miRNA ……) 雅各布Fran?ois Jacob（1920-，法国） 1939年，巴黎医学院，立志当名外科医师； 1940年，加入了自由法国部队，被派到非洲任军医 ； 1944年，在诺曼底身受重伤，获得二战中法国最高军事勋章-解放十字勋章； 1947年，医学博士；1954年，巴黎大学理学博士； 1950年，进入了巴斯德研究所，1965年获诺贝尔医学奖； 2005年，发现橙花酵素，获诺贝尔奖提名； 在失去了人生最重要的东西——健康之后,如果你能改变初衷, 选择适合自己的事业, 那么, 你有可能获诺贝尔奖。 是对人类健康的关注鼓舞着我，我必须为了人类的健康用尽我所有的努力，这是道义和责任。 2011年诺贝尔生理学或医学奖 美国科学家布鲁斯·博伊特勒、法国科学家朱尔斯·霍夫曼和加拿大科学家拉尔夫·斯坦曼 免疫学领域：受体/树突状细胞 分子生物学与医学 治病救人 原位杂交技术－筛选21三体（间期） 腺苷脱氨酶(ADA)缺乏的严重联合免疫缺陷(SCID) 病因: 淋巴细胞缺乏ADA 腺苷、dATP堆积 破坏免疫功能 患儿很少活到成年 克隆与“动物药厂” The Nobel Prize in Physiology or Medicine： 1978年 Arber等 限制性核酸内切酶的发现 2006年 Fire，Mello RNA干扰 2007年 Smith等 基因打靶 课程主要内容 ? 核酸和蛋白质的结构与功能及相互作用是分子水平生命活动的基础； ? 内源基因的突变、表达及调控的异常和外源致病基因的侵入是人类疾病发生、发展的根本原因。 核酸（DNA，RNA）和蛋白质是生物体中最重要的生物大分子，是分子生物学研究和分子诊断的对象。 核酸的化学组成 碱基 嘧 啶 磷酸 DNA的双螺旋结构 特征： ①两条链以反向平行的方式围绕同一中心轴向右盘绕 ②主链处于螺旋的外侧（核糖+磷酸） 亲水核糖平面与螺旋轴平行 碱基处于螺旋的内侧，与中轴垂直 ③螺距：10bp—3.4nm—3600 ?=2nm ④大沟与小沟： 蛋白质识别DNA的特定遗传信息的关键点 ⑤ 碱基互补配对A = T,C≡G 核酸变性 在某些理化因素的作用下，核酸双链分子碱基对的氢键断裂，疏水作用被破坏，双链螺旋或发夹结构被拆开，有规则的空间结构被破坏，形成单链分子，称为核酸的变性。 第一节 核酸分离纯化的设计及原则 第二节 真核细胞基因组DNA的分离纯化 第三节 质粒DNA的提取与纯化 第四节 真核细胞RNA的分离纯化 核酸的一般理化性质 多元酸，具较强的酸性。 DNA是线状高分子，粘度很大，碱性条件下稳定；RNA分子较小，粘度也小，对酸稳定。 核酸分子在机械力的作用下易发生断裂。 碱基有共轭双键，具紫外吸收特性，最大吸收峰在260nm。可对核酸进行检测和定量，也可分析纯度。 核酸变性 ——加热、极端的pH、有机溶剂如甲醇、乙醇、尿素及甲酰胺等。 第一节 核酸分离纯化的设计及原则 核酸分离纯化的原则 核酸的释放,核酸的浓缩、沉淀与洗涤 核酸的鉴定方法（浓度，纯度，完整性） 核酸的保存 材料与方法的选择 临床诊断与研究常见的标本——血液、尿液、唾液、组织及培养的细胞。 不同研究目的对核酸的完整性、纯度、产量及浓度有不同要求，另外尚需考虑制备核酸所需的时间与成本。 不影响核酸制品质量与产量的前提下，应选安全的试剂与制备方案。 保持核酸的完整性（一） 尽量简化操作步骤，减少对核酸的破坏； 合适pH值（pH4－10） 过酸或过碱－破坏磷酸二酯键 减少机械剪切力，包括剧烈的溶液振荡、搅拌，使溶液快速通