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柴胡皂苷含量测定方法研究进展 　　作者简介：马璇，女，新疆焉耆人，1986年4月生，党员，生药学硕士，新疆维吾尔药业有限责任公司研发人员，从事维吾尔药研发。 　　摘要：柴胡为常用中药材，具有解表和里、舒肝解郁、升举阳气等功效，柴胡所含的化学成分较复杂，其主要的药效成分为柴胡皂苷和挥发油类，其中柴胡皂苷类成分的含量较高，许多研究者对其含量测定方法进行研究，本文就对国内外研究者进行的含量测定方法进行简单概述。 　　关键词：柴胡；皂苷；含量测定；进展 　　【中图分类号】 　　R453 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）06-0038-02 　　柴胡皂苷类成分是柴胡中的标示性成分，经过多年研究后其组成成分类型较为明确，也是最为公认的活性成分，其在柴胡药材中含量较大。要充分实现柴胡的药用价值，就需要控制柴胡制剂的内在质量，选择合理的含量测定方法。 　　1 柴胡皂苷类成分的的含量测定 　　1.1 柴胡总皂苷的测定 　　1.1.1 紫外-分光光度法测定总皂苷： 　　分光光度法不仅能测定有色物质，还能测定有共轭结构的无色物质，操作简单、灵敏、适用面广，常用于三萜皂苷的分析测定。由于柴胡皂苷无色，可以加入适当的试剂显色后测定，此方法常用两种显色体系：对二甲氨基苯甲醛-硫酸体系[1] 和香草醛-冰醋酸体系[2]。 　　有研究将柴胡样品经酸处理后用紫外分光光度法测定柴胡总皂苷[3]，柴胡中主要皂苷 a，d 分子结构中有 13，28 位醚键，对酸不稳定，酸性条件下醚键断裂形成有共轭体系的二烯体柴胡皂苷 b1，b2，在紫外光区产生明显吸收峰，从而可以在 252 nm最大吸收处测定，见Fig.1.1。由于柴胡中皂苷以 a，c，d 为主，而且均有不稳定的醚键结构，所以将这些皂苷在经酸水解后转化为二烯体皂苷进行紫外测定的方法，基本可以反映总皂苷的含量。 　　Fig.1.1 The transformation of saikoponins 　　1.1.2 高效液相测定柴胡总皂苷： 　　Hideyou Suzuki等[4]使用 HPLC 测定柴胡总皂苷，并对分析条件进行优化。在柴胡提取物中加入稀释的氢氧化钠使乙酰化柴胡皂苷被皂化，再经酸中和后，使用十八烷基硅烷（ODS）柱进行处理，以柴胡皂苷a和柴胡皂苷d为对照，在 206 nm 处测定峰面积，计算总皂苷含量。这种方法省时方便，复杂样品可同时处理。 　　2 柴胡皂苷单体的测定 　　2.1 薄层色谱法： 　　该方法是用特定波长的光照射在薄层板上，对薄层板上吸收紫外光或可见光的斑点或经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品分析，是常用的中药含量测定方法。刘伟等[5]用定量毛细管吸取样品和对照品溶液，按薄层条件进行展开，进行反射法锯齿扫描测定，以斑点的面积来比较柴胡皂苷的含量。 　　2.2 高效液相法： 　　高效液相色谱法分离效率高、分析速度快、检测灵敏度高，可广泛应用于成分测定中。2010 版《中华人民共和国药典》和日本药局方第 15 版[6]均使HPLC进行测定。 　　HPLC 法测定柴胡皂苷通常接不同检测器，常用的有HPLC-ELSD[7] HPLC-DAD[8] 等，Yuanwu Bao [9]等使用 LC-MS/MS 同时测定柴胡药材和小柴胡汤中 15 种柴胡皂苷及其衍生物，并对电离条件进行优化，结果显示负离子模式能达到最佳的分析物电离灵敏度并获得最多的碎片信息，可以准确快速地测定柴胡皂苷的含量。 　　Xiu-Qin LI 等[10]在样品中加入温和的酸使柴胡皂苷 a，d 分别完全转化为柴胡皂苷 b1，b2，使用 HPLC-PDA 在 250nm 处测定二者含量。 　　2.3 毛细管电泳： 毛细管电泳（high performance capillary electrophoresis，HPCE）是近几十年发展起来的一种分离分析技术，它以弹性石英毛细管为分离通道，以高电压直流电场为驱动力，依据供试品中各组分的淌度 （单位电场强度下的迁移速度） 和 （或） 分配行为的差异而实现各组分分离的一种分析方法。 　　You-Zung Hsieh 等[11]使用毛细管电泳来测定柴胡皂苷含量，并比较了不同阴离子表面活性剂，胆汁盐和十二烷基硫酸钠（SDS）的分离效果，在 SDS 中加入 r-环糊精则能得到良好的分离效果。 　　2.4 膜免疫测定： 　　Osamu Morinaga等[12]以聚醚砜薄膜（PES）为固相膜，乙腈：水（4：1）用于溶解柴胡皂苷标准品、柴胡提取物，用柴胡皂苷 a 的单克隆抗体进行印迹测定，柴胡皂苷在 PES 上形成的有色斑点可以用 NIH 图像软件处理，从而计算出皂苷含量。 　　2.5 酶