柴胡皂苷对抑郁模型大鼠海马神经元保护作用.docVIP

柴胡皂苷对抑郁模型大鼠海马神经元保护作用 　　【摘要】 目的：探讨柴胡皂苷对抑郁模型大鼠行为及海马神经元细胞凋亡的保护作用。方法：采用随机数字表法将60只SD雄性大鼠分为对照组、模型组、氟西汀组和柴胡皂苷组，每组15只。采用慢性不可预见性应激刺激（CUMS）加孤养方式复制抑郁模型。于造模第2天开始，对氟西汀组和柴胡皂苷组大鼠进行灌胃给药。在实验的第1、7、14、21天，通过糖水消耗量实验检测大鼠行为学改变。采用RT-PCR法对各组大鼠脑海马神经元JNK、Bad mRNA进行定量分析。结果：对照组、柴胡皂苷组、氟西汀组第14及21天糖水偏爱度均高于模型组，JNK、Bad mRNA表达量均低于模型组，比较差异均有统计学意义（P0.01）。结论：柴胡皂苷可以有效控制大鼠抑郁症状，其机制可能与降低海马组织中JNK、Bad蛋白表达有关。 　　【关键词】 柴胡皂苷； 海马； 抑郁； 凋亡信号调节激酶1 　　抑郁症的发病机制目前有多种假说，有观点认为抑郁易损基因与心理应激的共同作用，导致的氧化应激、神经元凋亡与抑郁症的发生密切相关[1]。基于寻找抗抑郁作用的靶治疗点，科学界开展了大量的研究，并取得一定的进展[2-3]。柴胡皂苷是柴胡的主要成分，具有解郁醒脑、改善抑郁样症状的作用，但机制尚不明确。本实验从柴胡皂苷抗凋亡、缓解神经元损伤角度探讨其抗抑郁作用机制，现具体报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 2～3月龄清洁级雄性健康SD大鼠60只，体重180～200 g，由大连医科大学动物实验中心提供，许可证号：SCXK（辽）2008-0002。采用随机数字表法将其分为正常对照组、模型组、氟西汀组和柴胡皂苷组共四组，每组15只。 　　1.2 药品及试剂 柴胡皂苷（南京泽朗医药科技有限公司提供，批号：ZL043583DY），盐酸氟西汀胶囊（苏州俞氏药业有限公司。批号：，PCR试剂盒、反转录试剂盒由宝生物工程有限公司提供。 　　1.3 仪器 PCR System扩增仪2700为Applied Biosystems公司产品，荧光定量PCR仪ABI7300为ABI公司产品。 　　1.4 方法 　　1.4.1 造模及给药 对照组不给予任何刺激。其余各组大鼠均分笼饲养并进行21 d慢性不可预见性应激（CUMS）刺激，方法根据Katz法进行改进[4]。于造模第2天开始氟西汀组采用氟西汀1.2 mg/ （kg?d），柴胡皂苷组采用柴胡皂苷25 mg/ （kg?d）进行灌胃给药，对照组及模型组给予等量生理盐水。 　　1.4.2 大鼠行为学评价 在实验的第1、7、14、21天测定1 h大鼠饮用1%蔗糖水及纯水量，计算大鼠糖水偏爱度（糖水偏爱度=糖水消耗量/总液体消耗量×100%）。 　　1.4.3 RT-PCR法检测JNK、Bad的mRNA含量 分离海马，按RNAiso Reagent试剂盒操作流程提取海马组织总RNA并测验RNA纯度及浓度。按照SYBR Premix Ex Taq（Perfect Real Time）kit试剂盒说明进行实验，反应体系为25 ?L。反应引物：JNK-F1：5’-CTGTGCTAATGACCTGCTTGTTG-3’，JNK-R1：5’-TACCCGAGAGTTTGGGCTGT-3’，Bad-F1：5’-AGACACCTGAGCTGACCTTGGAG-3’，Bad-R1：5’-GTTGAAGTTGCCATCAGCAAACA-3’，按下列公式计算△△Ct值：△CT（test）=CT（target，test）-CT（ref，test），△CT（calibritor）=CT（target，cal）-CT（ref，cal），△△CT=△CT（test）-CT（calibritor），各样品mRNA表达水平均用2-△△CT表示。 　　1.5 统计学处理 运用SPSS 13.0软件包对所得数据进行统计学处理，计量数据使用（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD检验法，以P0.05为差异有统计学有意义。 　　2 结果 　　2.1 大鼠行为学评价 对照组、柴胡皂苷组、氟西汀组第14及21天糖水偏爱度均高于模型组，比较差异均有统计学意义（P0.01），见表1。 　　2.2 柴胡皂苷对大鼠海马JNK、Bad mRNA表达的影响 对照组、柴胡皂苷组、氟西汀组JNK、Bad mRNA表达量均低于模型组，比较差异均有统计学意义（P0.01），见表2。 　　3 讨论 　　随生活环境改变，影响人类健康的心境疾病逐年增多，其中尤以抑郁症为著，为探讨抗抑郁新药国内外科研团队开展了多年的研究[4-5]。抑郁症的机制复杂，根治不彻底是现今医疗界的难题[6]。本实验采用孤养结合CUMS