槲皮素对动脉性勃起功能障碍模型大鼠阴茎海绵体压力和一氧化氮合酶影响实验研究.docVIP

槲皮素对动脉性勃起功能障碍模型大鼠阴茎海绵体压力和一氧化氮合酶影响实验研究 　　【摘要】目的：研究槲皮素对动脉性勃起功能障碍的影响。方法：以结扎双侧髂内动脉所致动脉性勃起功能障碍大鼠为动物模型，经过给药后，通过检测不同时间点各组大鼠阴茎海绵体动脉压（ICP）、海绵体组织一氧化氮合酶活性表达、内皮细胞数量以及蛋白激酶G（PKG）的表达变化来评价槲皮素对A-ED模型大鼠的治疗效果及其作用机制。结果：经治疗后，槲皮素、西地那非组均能提高ICP，槲皮素组与模型组ICP有显著差异（P0.05） ；槲皮素组内皮细胞数量明显多于模型组，差异有显著意义（P0.01） ；槲皮素组一氧化氮合酶（eNOS）表达高于模型组，差异极显著（P0.01）； 西地那非能提高蛋白激酶（PKG）表达水平，槲皮素组对蛋白激酶G的表达未见影响。结论：槲皮素能明显改善因缺血缺氧造成的勃起功能障碍大鼠勃起功能??可能通过减少内皮细胞凋亡、改善eNOS表达，以及NOS酶的活性来改善A-ED模型的勃起功能。 　　【关键词】槲皮素；动脉性勃起功能障碍；一氧化氮合酶；海绵体内压力；内皮细胞蛋白激酶G 　　【中图分类号】R698【文献标志码】A 　　阴茎动脉供血不足是导致ED最常见的原因之一。阴茎血管床动脉灌注降低可造成慢性缺血、缺氧，引起海绵体内皮细胞和平滑肌的显微结构以及功能损害，而导致动脉性勃起功能障碍（A-ED）。国外建立了比较稳定的A-ED动物模型。临床和实验研究的结果发现，长期持续性的阴茎动脉灌注不足会损害阴茎的显微结构。NOS是启动阴茎勃起的重要启动靶点。槲皮素是近年来研究热点，方向设计扩冠、抗炎、抗肿瘤及增强免疫诸多方面。大量体外实验证实，槲皮素不但能降低因细胞缺血缺氧产生的高氧自由基、丙二醛、乳酸脱氢酶、脂质过氧化物及内皮素，而且增加前列环素、一氧化氮合酶释放，增强因缺血缺氧导致的血管内皮细胞损伤增加代谢和膜稳定作用，从而改善代谢综合症病人的血管内皮功能，改善勃起功能。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　1.1.1药物槲皮素分析纯（环亚泰克生物医学技术有限公司，HPLC分析纯度98%）、西地那非纯品（美国Prizer公司惠赠），肝素生理盐水（50U/mL）、戊巴比妥钠等药品由中国中医科学院动物实验中心提供。eNOS合酶试剂盒（武汉博士德生物工程公司）DAB（美国DAKO公司）。 　　1.1.2实验仪器多导电生理仪（美国Biopac公司）、显微手术器械以及26G穿刺针。 　　1.1.3实验动物健康雄性Wistar大鼠72只（中国中医科学院实验中心），体重200～220g。实验前3d适应性喂养。按随机区组法等分成6组，分别为：空白组（K），假手术组（J），模型对照组（M），阳性药组（W），槲皮素高（D）、低剂量组（X）。每组12只。 　　1.2方法 　　1.2.1造模方法实验室常规条件下适应性喂养3d后进行手术造模。术前禁食8h，不禁水。除空白组及假手术组外，分别予戊巴比妥钠40mg/kg麻醉后，碘伏消毒，下腹正中切口，暴露双侧髂动脉，解剖显露双侧髂内动脉，从髂内动脉起始部采用7-0尼龙线结扎髂内动脉，4-0尼龙线缝合切口，关腹。假手术组给予戊巴比妥钠麻醉后，分离髂内动脉不结扎，用4-0尼龙线缝合切口，关腹。空白组不做处理。 　　1.2.2给药方法造模后第2d各组大鼠开始灌胃给药，给药体积为10mL/kg。槲皮素大、小剂量组分别给予槲皮素生理盐水40mg/kg、10mg/kg。阳性药组给予万艾可12mg/kg。空白组、模型对照组、假手术组分别灌胃给予等体积生理盐水。各组大鼠分别于给药第14、28d，随机抽取6只大鼠检测。 　　1.2.3大鼠阴茎海绵体压力（ICP）测定给药后第14、28d，各组取6只大鼠麻醉。暴露大鼠阴茎海绵体，用穿刺针穿入，通过电生理仪连接并监测海绵体压力。导管内用肝素生理盐水防止凝血。暴露前列腺后外侧叶，用手术显微镜在其表面寻找盆腔神经节，从该神经节向下，沿其后外侧与直肠之间寻找阴茎海绵体神经；术野滴加石蜡油防止腹腔内液体蒸发以及电极间绝缘。用双极银丝电极钩住CN做为刺激电极，进行电刺激。电刺激的参数设定为3V，15Hz，刺激时间为60s。两次电刺激间隔时间为20min。观察ICP变化并记录。手术和ICP检测过程失败的大鼠，实验数据不计入结果。 　　1.4NOS活性、内皮细胞计数及PKG蛋白测定 　　取大鼠阴茎海绵体组织，运用免疫组织化学方法染色，检测各组大鼠阴茎组织NOS水平及PKG蛋白水平，并对内皮细胞计数。将已制备好的各组动物海绵体组织蜡块在超薄切片机下制成5μm切片，常规脱蜡至水后，按即用型ABC试剂盒说明书进行标准操作。 　　1.5数据处理 　　数据用均数±标准差表示，采用SPSS13.0 统计软