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植物铜稳态相关miRNAs研究进展 　　摘要：铜（Cu）是植物生长发育所必需的微量元素，参与光合作用、呼吸作用及木质素合成等多个生物学过程。铜离子具有氧化还原特性，低铜或者过量铜都会对植物造成伤害，因此植物在长期进化过程中产生了一套完整的铜稳态调控体系，其中miRNA在此体系中扮演着重要的角色。介绍了miR397、miR398、miR408、miR857、miR1444等5种 Cu-miRNAs，它们的靶基因编码了植物细胞中非常重要的4大类含铜蛋白――漆酶、超氧化物歧化酶、质体蓝素和多酚氧化酶。在铜胁迫条件下，miRNA通过调控靶基因的表达优化铜离子的分配，既保证了铜的正常供应，又避免了铜毒害。 　　关键词：铜稳态；Cu-miRNAs；铜胁迫；研究进展 　　中图分类号： Q754文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2017）09-0005-05 　　铜（Cu）广泛存在于动物、植物和微生物体内，是正常生命活动所必需的微量矿质元素。铜在植物的生长发育过程中行使重要功能，植物中含有100多种不同的含铜蛋白，参与各种新陈代谢过程，如光合作用、呼吸作用电子传递链、活性氧代谢、对乙烯的感受、氮代谢、细胞壁的木质化及花粉的形成等[1]。在这些过程中，铜作为辅因子与细胞内Cu/Zn超氧化物歧化酶（Cu/Zn SOD）、细胞色素氧化酶、多酚氧化酶、抗坏血酸氧化酶、多胺氧化酶等多种酶结合后行使生物学功能。 　　缺铜条件会导致植物叶片失绿，叶尖卷曲变白，植株矮小，生长缓慢，产量下降。植物细胞中铜浓度过高会使植株生长发育不良，根部畸形，根细胞质膜损伤，质膜过氧化作用增强，氮素吸收及氨基酸合成受阻；铜浓度过高，还可使植物叶片黄化，叶绿素a/b比降低，光合系统Ⅰ、Ⅱ的电子传递能力降低，光合作用速率下降；此外，铜浓度过高还会使细胞核中DNA与蛋白质的结构被破坏、DNA复制和转录受影响，使含铜蛋白的合成、基因表达调控发生紊乱[2-4]。 　　植物在光合电子传递链、呼吸链中产生的活性氧（ROS）在生成部位就会被及时分解；而当植物吸收过量铜后，植物细胞会快速积累超氧化物阴离子（ O-2? ）、羟自由基（?OH）、过氧化氢（H2O2）和单线态氧（1O2）等活性氧，并进一步毒害植物细胞[5]。此外，自然界中的植物在不同土壤环境条件下可能会面临重金属胁迫，但植物铜中毒的情况并不常见，由此认为，植物通过在进化过程中形成完善的铜稳态调控体系应对上述胁迫条件，以维持正常的生长发育过程。一般认为，环境中的铜离子通过CTR铜转运家族成员高效转运到植物细胞内，之后，铜伴侣蛋白将铜离子运送至需铜蛋白。铜伴侣蛋白ATX1、CCH向铜转运P型ATP酶HMA5、RAN1或Ccc2运送铜离子，之后铜离子进入分泌途径或者运送到细胞外；COX铜伴侣蛋白将铜离子运送到线粒体中的细胞色素C氧化酶，参与呼吸链中的电子?鞯荩?P型ATP酶PAA1、PAA2将铜离子运送到质体蓝素参与植物光合作用；铜伴侣蛋白CCS将铜离子运送给铜锌超氧化物歧化酶，参与细胞对氧自由基的清除[6]。在这些过程中，miRNA对铜稳态的调节至关重要。 　　1miRNA简介 　　1.1miRNA的发现 　　miRNA是一类目前被广泛研究的内源性单链非编码小分子RNA，长度约为16～29 nt，大部分长度为21～23 nt[7]。1993年首次在秀丽新小杆线虫中发现了可时序调控胚胎后期发育的miRNA lin-4[8]。2000年，Reinhart等在线虫中发现了第2个异时性开关基因let27，并在人类细胞中找到了该基因的同源基因[9]。2001年，小RNA被统一命名为microRNA（miRNA）。2002年，4个科学小组从植物中分别发现了miRNA，自此拉开了植物miRNA研究的序幕[10-13]。尽管植物miRNA的研究起步较晚，但是随着研究方法的不断革新，越来越多的植物miRNA逐步被鉴定（数据库网址：http：//microrna.sanger.ac.uk）。随着高通量测序技术的发展与应用，相信未来几年内该数据库中植物miRNA的信息还会被快速丰富。 　　1.2miRNA的生物合成 　　编码miRNA的基因在RNA聚合酶Ⅱ的作用下形成初级转录物 pri-miRNA[14]，长度大约为300～1 000核苷酸。pri-miRNA在一种类Dicer酶――DCL1的作用下被剪切成包含茎环结构的60～300 nt的miRNA前体pre-miRNA[15]。然后，pre-miRNA被DCL1切割产生约21～26 nt的双链miRNA，构成miRNA/miRNA*双链分子[16]。在miRNA甲基转移酶HEN1的作用下，miRNA/miRNA*双链分子3′端最后1个核苷酸发生甲基化修饰，形成成