槲皮素对转化生长因子诱导人脐静脉内皮细胞内皮―间质转化影响.docVIP

槲皮素对转化生长因子诱导人脐静脉内皮细胞内皮―间质转化影响 　　摘要：目的 观察槲皮素对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）-12内皮-间质转化的影响，探讨其作用机制。方法 CCK-8法检测不同浓度槲皮素和/或TGF-β1干预HUVEC-12 72 h后细 摘要：目的 观察槲皮素对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）-12内皮-间质转化的影响，探讨其作用机制。方法 CCK-8法检测不同浓度槲皮素和/或TGF-β1干预HUVEC-12 72 h后细胞活力；RT-PCR和免疫荧光双染检测内皮及间质标记物的转变；Western blot检测信号通路；RT-PCR检测在转变过程中发挥关键调节作用的转录因子。结果 RT-PCR和免疫荧光双染结果均提示，TGF-β1（10 ng/mL）连续刺激HUVEC-12 72 h可诱导其转化为成纤维细胞表型，表现出更多的间质标记物升高，内皮标记物降低；Western blot和RT-PCR结果显示，槲皮素呈浓度依赖性抑制smad2/3的磷酸化；TGF-β1刺激后，下游调控内皮-间质转化的重要转录因子snail1、twist1、twist2、ZEB1、ZEB2均明显升高，而100 μmol/L槲皮素则可显著下调下游的5种转录因子。结论 槲皮素可抑制TGF-β1诱导的HUVEC-12发生内皮-间质转化而发挥抗纤维化的作用。 　　?P键词：槲皮素；内皮-间质转化；脐静脉内皮细胞；纤维化 　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.02.017 　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）02-0065-05 　　胞活力；RT-PCR和免疫荧光双染检测内皮及间质标记物的转变；Western blot检测信号通路；RT-PCR检测在转变过程中发挥关键调节作用的转录因子。结果 RT-PCR和免疫荧光双染结果均提示，TGF-β1（10 ng/mL）连续刺激HUVEC-12 72 h可诱导其转化为成纤维细胞表型，表现出更多的间质标记物升高，内皮标记物降低；Western blot和RT-PCR结果显示，槲皮素呈浓度依赖性抑制smad2/3的磷酸化；TGF-β1刺激后，下游调控内皮-间质转化的重要转录因子snail1、twist1、twist2、ZEB1、ZEB2均明显升高，而100 μmol/L槲皮素则可显著下调下游的5种转录因子。结论 槲皮素可抑制TGF-β1诱导的HUVEC-12发生内皮-间质转化而发挥抗纤维化的作用。 　　关键词：槲皮素；内皮-间质转化；脐静脉内皮细胞；纤维化 　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.02.017 　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）02-0065-05 　　心室重构过程中会发生心肌间质纤维化，而间质纤维化的主要特点为细胞外基质过度沉积和间质细胞如肌成纤维细胞的增殖，进而导致心肌组织毛细血管密度降低，心室顺应性也降低，最终心肌顺应性下降，导致心力衰竭。研究显示，抗纤维化治疗可明显改善心力衰竭患者预后，在心肌纤维化进程中，除固有的成纤维细胞会发生活化增殖外，内皮细胞、上皮细胞、单核细胞、循环纤维细胞等均可通过一定机制转化为成纤维细胞，抑制内皮-间质转化可显著改善心室重构及心功能[1-2]。 　　槲皮素及其衍生物分布广泛，现代药理研究表明，其具有抗肿瘤、抗氧化、抗血小板聚集、保护心血管功能以及抗病毒的作用[3]，具有抑制成纤维细胞增殖、抑制胶原合成、阻止氧化损伤、抑制血管生成等抗纤维化作用[4-5]。本实验观察槲皮素对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）-12内皮-间质转化的影响，探讨其作用机制。 　　1 实验材料 　　1.1 药物 　　槲皮素，购自上海融禾医药科技发展有限公司，纯度≥99%，货号117-39-5。 　　1.2 细胞 　　HUVEC-12，YRGene（NC006）。37 ℃、5.0%CO2培养箱培养，当细胞密度铺满80%培养皿底时，采用0.25%胰酶消化后进行传代。对细胞采取刺激前，将培养细胞所用的培养基换为无血清培养基。 　　1.3 主要试剂与仪器 　　DMEM basic（1×）培养基、新生小牛血清（NBS）、胰酶，Gibco； CCK-8检测试剂盒，日本同仁化学研究所；RT-PCR试剂盒，Roche；TGF-β1，PEPROTECH公司；ECGS，ScienCell公司；CD31、vimentin抗体，A