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浅谈转基因动物研究进展 　　摘　要　回顾了国内外关于转基因的研究，对转基因动物获得的主要方法如显微原核注射法、逆转录病毒感染法、胚胎干细胞介导法等常用的方法进行了综述；阐述了转基因动物的鉴定方法，最后对转基因动物在理论和实践方面的应用情况进行了综述。 　　关键词 转基因 转基因动物 转基因技术 　　 　　转基因动物始于20世纪70年代末，是目前生物技术领域研究的热点之一，具有重大的科学意义和应用价值。转基因动物是通过向受精卵或早期胚胎中导入外源DNA，有目的地对生物的遗传物质基础进行修饰、改造，培育新的品系。若外源基因与动物本身的基因(染色体)整合在一起，外源基因就能随细胞的分裂而增殖，在体内得到表达，并能稳定地遗传给后代。转基因技术在农业、医学和生物制药等领域已经得到广泛的应用，如定向育种、建立人类疾病的病理模型、转基因生物反应器等。 　　 　　1．转基因动物的研究概况 　　 　　1.1转基因动物的国外研究 　　转基因动物的研究最早始于1980年，高登等用显微原核注射方法，将重组DNA导人小鼠受精卵，首次获得了带有外源基因的转基因小鼠。帕米特于1982年也获得了转基因小鼠，并通过实验证明融合基因可以在宿主体内得到有效正确地表达，表达产物可以在宿主动物内行使功能。哈姆尔等成功获得了转基因兔、绵羊和猪，这项工作被认为在转基因动物研究历程上具有重要意义。 　　1997年克隆羊“多莉”的诞生在转基因动物历史上具有划时代的意义，它突破了有性生殖的框架，表明了高等动物也可以通过无性生殖来繁殖。兹伯尔于1998年利用该法分别得到转基因克隆牛和用来治疗人血友病的转基因克隆绵羊。近年来利用转基因克隆技术又获得了克隆猪、体内含有外源基因的转基因猪、体内有2个基因被“关闭”了的转基因克隆猪和基本不含人体免疫排斥基因的“基因敲除”克隆猪等。 　　 　　1.2转基因动物的国内研究概况 　　我国于1984年开始了转基因动物的相关研究，并获得了含入β－珠蛋白基因的转基因小鼠。随后获得了含人生长激素(MT-HGH)基因的转基因泥鳅和小鼠。1987年获得含有大肠杆菌galk和gpt基因的转基因小鼠。以后又相继获得了含HbgAg乙型肝炎表面抗原基因的转基因兔、转基因猪、含EPO基因和人乙型肝炎表面抗原基因(HbgAg)2种乳腺特异性表达的转基因山羊、含入凝血因子Ⅸ的转基因山羊、含人血清白蛋白基因的转基因奶牛、含“生物钢”蛋白基因的转基因老鼠等。 　　 　　2．转基因的主要技术 　　 　　2.1显微原核注射法 　　高登等首次建立的转基因方法，基本过程是：利用显微操作系统和显微注射技术将外源基因直接通过注射器注入实验动物的受精卵中，再通过胚胎移植技术将整合有外源基因的受精卵移植到受体子宫内继续发育成转基因动物。实验的过程中大多数转基因动物能把整合的基因传给后代，以建立转基因动物体系。随后，葛瑞姆菲利用显微原核注射法成功获得了转基因牛。 　　 　　2.2逆转录病毒感染法 　　杰内士利用逆转录病毒作为转基因载体，感染胚胎成功获得转基因动物：将目的基因重组到逆转录病毒RNA载体上，制成高滴度的病毒颗粒，人为感染着床前或着床后的胚胎，外源基因进入宿主细胞后，反转录为DNA，并在整合酶和其末端特殊核酸序列的作用下整合到宿主细胞的基因组中进行表达和遗传得到转基因动物。 　　 　　2.3胚胎干细胞介导法 　　胚胎干细胞(ES细胞)是早期胚胎的内细胞团(ICM)经体外培养建立起来的多功能细胞系，利用反转录病毒载体、电击法等将外源基因导入ES细胞内，外源基因通过随机插入或者同源重组的方式整合到胚胎干细胞的基因组中，然后把转染的胚胎干细胞注射入受体囊胚腔，参与各种嵌合体的形成。将来出生的动物的生殖系统就有可能整合有外源基因，通过杂交繁育得到含纯合目的基因的个体，即为转基因动物。 　　 　　2.4精子载体法 　　精子载体法分为体外受精法和胞质内显微注射法。布兰克首先利用体外受精法成功获得了转基因动物：将成熟的精子与外源DNA进行预培养，精子核后帽区结合DNA后，与卵子受精形成的受精卵带有外源DNA。安斯内利用胞质内显微注射法制作转基因小鼠：预先将小鼠精子进行破膜处理，与编码绿色荧光蛋白质或编码β－半乳糖苷的Lacz基因的外源DNA短时间共孵育，然后用显微注射法注入MII期的卵母细胞质中，得到的转基因胚胎转移到假孕母鼠的子宫中进行整合，从而得到转基因小鼠。 　　 　　2.5体细胞核移植转基因法 　　士内克等用体细胞核移植转基因法制作了世界上首例转基因羊：将外源基因导入到动物成年体细胞或胎体成纤维细胞中，再将该细胞进行培养，选择其中带有外源基因的细胞进行扩增，用这种细胞的细胞核进行核移植，将重组胚进行培养，或者植入同步化假孕动物