甘草皂苷对卡拉库尔羊血液中免疫球蛋白IgA和IgG影响.docVIP

甘草皂苷对卡拉库尔羊血液中免疫球蛋白IgA和IgG影响 　　摘要：为了研究甘草皂苷对卡拉库尔羊血液中免疫球蛋白IgA和IgG的影响，探讨甘草皂苷的免疫学效应。选取健康的卡拉库尔羊6只，随机分为2组，每组3只，平均体重为18.65 kg/只。饲养的第15、第30、第45天采集血液并分离血清，采用酶联免疫吸附法检测卡拉库尔羊血清中免疫球蛋白IgA、IgG的水平。结果显示：第15、第30、第45天的IgA试验组含量分别为84.75、93.16、86.31 μg/mL，对照组含量分别为43.13、42.57、32.63 μg/mL，且试验组显著高于对照组（P0.05）；IgG试验组的含量分别为87.99、83.00、76.29 μg/mL，对照组的含量分别为46.05、43.57、41.55 μg/mL，且试验组显著高于对照组（P0.05）。说明甘草皂苷可显著提高卡拉库尔羊血液中免疫球蛋白IgA、IgG的含量。 　　关键词：甘草皂苷；卡拉库尔羊；血液；IgA；IgG 　　中图分类号： S858.262.4文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）01-0172-02 　　收稿日期：2013-05-31 　　基金项目：新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室课题（编号：HS201106）；新疆生产建设兵团博士基金（编号：2009JC08）。 　　作者简介：刘俊峰（1980―），男，内蒙古乌兰察布人，硕士，讲师，从事兽医药理与免疫药理学研究。E-mail：liujunfeng423@163.com。 　　通信作者：郭雪峰，博士，副教授，从事反刍动物营养与饲料添加剂研究。E-mail：guoxuefeng807@163.com。甘草皂苷别称甘草酸，是甘草的主要成分之一[1]，具有甜味（即甘草甜素），它属于三萜类皂苷，为次生代谢产物。由于它的水溶液容易引起肥皂样持久性泡沫，因此称之为皂苷。随着免疫学的迅速发展，对中草药添加剂的免疫药理研究也取得了较快的发展。国内外许多科学家对中草药添加剂在人、畜疾病上的免疫，尤其是与免疫有关的疾病防治进行了大量的科学研究。例如，苜草素是一种苜蓿提取物，能增强免疫系统功能，相对减少了营养的沉积量[2]；黄芪皂苷能提高和促进调节机体免疫功能。另外，还有一些关于皂苷对人的免疫及其他应用的研究，如高血脂病人应用甘草甜素后，血浆免疫球蛋白IgG、IgA及补体C3含量均显著降低，其作用主要为免疫增强、免疫调节和免疫抑制3种。皂苷成分类型多样，结构复杂，性质不稳。 　　20世纪80年代，日本学者首次用试验证明，甘草甜素可抑制HIV增殖，并具有免疫激活作用[3]。张娴文等发现三七皂苷具有抗肝纤维化作用[4]。甘草皂苷主要具有增强巨噬细胞和细胞免疫的功能，但对体液免疫功能有抑制作用。甘草提取物抑制抗体的作用已经有不少报道，以羊的红细胞作为抗原免疫动物，其注射后不久，受抑制反应就会明显，而抑制程度与甘草提取物的剂量有关；甘草皂苷也可以促进羔羊生长，提高绵羊产毛量和产奶量；对绵羊疾病防治都有过研究，其效果也相对突出。本研究对卡拉库尔羊饲喂添加甘草皂苷的日粮，采集卡拉库尔羊血液并分离血清，测定免疫指标，旨在确定甘草皂苷对卡拉库尔羊血液IgA和IgG的影响，为开发以甘草皂苷为主要成分的饲料添加剂提供基础数据。 　　1材料与方法 　　1.1甘草皂苷的检验 　　1.1.1甘草的采集与前处理甘草于2012年3月在新疆阿克苏阿拉尔市十二团随机采集，将采集回来的甘草切成1～2 cm 的小段，晒至半干，再放于50 ℃恒温箱中烘干，再将样品放入精密粉碎机（xf-96b）中进行粉碎，重复2次，得到样本，采用新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室已经建立的提取方法提取甘草皂苷。 　　1.1.2皂苷的检测 　　泡沫试验取检品的热水溶液2 mL于带塞试管中，用力振摇3 min，即产生持久性蜂窝状泡沫（维持10 min以上），且泡沫量不少于液体体积的1/3。 　　醋酐浓硫酸试验取样品水溶液并置于平皿中，于水浴上蒸干，残渣加入少量冰醋酸使其溶解，再加入醋酐浓硫酸（19 ∶1）试液，呈现红紫色并变成绿色。 　　比色法[5]准确吸取标准品溶液，置于具塞试管中，水浴挥干溶剂，加入一定量的5%香草醛-冰醋酸溶液，再加入定量的高氯酸，摇匀，于水浴中加热，立即取出用流水冷却至室温，加入冰醋酸稀释，摇匀，以不加标准品的样品管为空白，于400～700 nm波长处进行扫描，香草醛高氯酸试剂在589 nm处有最大吸收峰，精密度高，加样回收率99.23%。 　　1.2卡拉库尔羊免疫球蛋白IgA、IgG的检测 　　1.2.1试验动物的饲养管理选取健康的卡拉库尔羊6只，随机分为2组，每组3只，平均体重为18.65 kg/只。试验所用基