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生鲜蔬菜消毒方法比较 　　摘要：利用大肠杆菌（Escherichia coli）构建生鲜蔬菜消毒过程中水污染模型和蔬菜污染模型，使用传统消毒方法单独处理被污染的水或蔬菜，分别比较其灭菌效率，并探究在传统消毒方法的基础上加入噬菌体进行辅助处理，分析其灭菌效率。结果表明，水污染模型中，0.004%硝酸银的消毒效果最理想，灭菌率超过90%；6种不同杀菌方式对菠菜的杀菌效果最好，其次是生菜、香菜。蔬菜污染模型中，0.10%硝酸银的消毒效果最理想，灭菌率超过85%，对生菜的杀菌效果最好，其次是香菜、菠菜。两种不同的模型中，加入噬菌体M13K07辅助作用，均可以提高硝酸银、次氯酸钠和紫外照射单独作用的灭菌率。 　　关键词：生鲜蔬菜；消毒；大肠杆菌（Escherichia coli）；噬菌体 　　生鲜蔬菜是人体营养物质、维生素、膳食纤维的重要来源，在中国农业生产中占有重要地位。近年来，中国生鲜蔬菜生产、流通和销售得到了长足发展，己经成为世界上第一大生鲜蔬菜生产国。蔬菜在生长过程中，因使用农药和在摘取、包装、运输、销售过程中的损坏，往往会被污染，其污染程度与蔬菜的表皮是否破损有关。表皮破损的蔬菜，细菌污染率较高，消毒不彻底易导致肠道传染病的发生。如何消除蔬菜表面的病原菌，在保证生鲜蔬菜的食用安全性下最大限度地保持蔬菜的营养价值具有重要的现实意义。 　　净菜也称新鲜消毒蔬菜，即用新采摘的蔬菜，经过整理（去掉不可食部分、切分等）、洗涤、消毒等加工操作，在无菌环境中，真空包装而制成的一种产品。净菜在生产过程中，常使用的消毒方法是紫外照射和化学试剂处理，但是紫外线的灭菌作用只在其辐照期间有效，净菜被处理后容易遭受二次污染。化学物质虽然可以达到持续消毒的目的，但在一些产业中，如水产养殖和食品工业等，不需要化学消毒剂的持续消毒。有研究报道，一些蔬菜经次氯酸钠消毒处理后，有高浓度三氯甲烷生成，产生食品安全隐患。 　　噬菌体是一类感染其他病毒或细菌细胞的病毒总称，其遗传结构简单，生命周期短，并且都以蛋白质外壳包裹的DNA或RNA为遗传物质，可从污水等自然环境或者食品原料中提取到，其特异性强、自我增殖快，具有专一性、裂解性，即将成为新一代天然、绿色、安全抗菌制剂。近年来，有关于应用噬菌体制剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等各种细菌性感染治疗的报道，其成功率均很高。美国食品和药物管理局已经同意将噬菌体用于肉类食品的储备。然而中国关于噬菌体的研究应用较少。 　　因此，本试验构建生鲜蔬菜消毒过程中水污染模型和蔬菜污染模型，使用传统消毒方法单独处理被污染的水或蔬菜，分别比较灭菌效率，并探究在传统方法的基础上加入噬菌体进行辅助处理，比较其灭菌效率，以期为生鲜蔬菜消毒，减少由病原菌引发的食源性疾病提供参考依据。 　　1.材料与方法 　　1.1材料 　　试验菌株为大肠杆菌地方分离菌株1、大肠杆菌地方分离菌株2、大肠杆菌噬菌体M13K07，购于北京宝科维食安生物技术有限公司。 　　1.2试剂与仪器 　　安琪胰蛋白胨、安琪酵母浸粉购自安琪酵母股份有限公司，琼脂粉购自北京奥博星生物技术有限公司，NaCl等其他试剂购自国药集团化学试剂有限公司。 　　紫外灯（254 nm，15 W，Philips TUVl5 W G15T8）、打孔器（直径0.7 cm）、生物分光光度计（Eppendorf AG 22331 Hamburg）均购自艾本德中国有限公司。 　　1.3方法 　　1.3.1噬菌体生物学特性 　　1）噬菌体效价：取500ul对数期大肠杆菌菌液（OD为1.0），以及100ul噬菌体稀释液（稀释倍数为10-6～10-9），充分混匀，37℃120 r/min振荡培养30 min。然后加入3 mL溶解好的42℃的2xYTTopAgar，振荡均匀，立刻倒平板，37℃培养过夜，计算噬菌斑的数目。 　　噬菌体效价（PFU/mL）=噬菌斑数×稀释倍数x10 　　2）噬菌体pH稳定性试验：取EP管，分别加入不同pH（4、5、6、7、8、9、10）的2xYT培养基100μL，然后将EP管置于37℃恒温水浴中：待温度平衡后加入100μL的噬菌体稀释液（109PFU/mL），恒温保存2 h。待作用时间结束后取样，测定处理后的噬菌体效价。 　　3）噬菌体紫外耐受性试验：取噬菌体稀释液（109PFU/mL）10mL于培养皿中，距离培养皿35 cm处，采用紫外灯照射，间隔15 min取样，测定噬菌体效价，共取样4次。 　　1.3.2消毒剂单独作用对生鲜蔬菜的影响 取大肠杆菌菌液稀释液（104CFU/mL），分别进行如下处理：①1 mL菌液分别加入2、5、10μL浓度为2%的AgN03溶液，作用10 min；②1 mL菌液分别加入10、20、40μL浓度为5%的NaCl0溶